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目的:本研究采用Zutshi肛门括约肌复合体损伤模型,观察不同的干细胞注射方式对创面的修复作用,进而探索温和灸联合不同方式的骨髓间充质干细胞移植对大鼠损伤肛门括约肌的结构和功能的影响,为临床应用提供一定的科学依据。方法:将120只SD大鼠随机分为温和灸+局部注射组,温和灸+静脉注射组,局部注射组,静脉注射组,温和灸组(每组24只)。所有大鼠均采用Zutshi大鼠肛门括约肌复合体损伤模型,造模成功后各组均采用温和灸15min或GFP阳性的骨髓间充质干细胞移植(局部、尾静脉)进行治疗,连续治疗7天。分别于术后7,14,28天进行各组大鼠肛门括约肌功能性检测,即肛压(收缩压、静息压)与肌电(振幅、频率)。于术后第28天时进行肛门括约肌组织学检测(免疫荧光,Masson染色)。免疫荧光(α-SMA或Desmin)定位大鼠括约肌创面GFP阳性BMSC;Masson染色定量比较各组间新生肌肉组织与胶原纤维的含量。结果:1.在造模后第28天时,温和灸+局部BMSC组新生肌纤维含量显著高于其他组(P<0.05),而局部BMSC组与温和灸+局部BMSC组的胶原纤维含量均低于其他组,但两者之间没有显著差异(P>0.05)。2.在造模后第28天时,温和灸+局部BMSC组创面GFP荧光强度最强,提示有更多的BMSCs在创面定植,但未发现荧光共定位。3.在术后7、14天,温和灸+局部BMSC组的静息压显著高于温和灸+静脉BMSC组、静脉BMSC组及温和灸组(P<0.05);温和灸+局部BMSC组与局部BMSC组的关于静息压的差异直到术后28天才具有统计意义(P<0.05)。在术后14、28天,温和灸+局部BMSC组收缩压显著高于其他组(P<0.05)。4.在术后7天时,各组EMG振幅与频率均无显著差异。术后14天,两组局部BMSC组的振幅均显著高于其他组(P<0.05),但两者之间没有显著差异。而温和灸+局部注射BMSC组频率也较其他组显著增高(P<0.05);直到术后28天,温和灸+局部BMSC组振幅才显著高于局部BMSC组(P<0.05)。结论:本实验通过研究温和灸与不同骨髓间充质干细胞注射方式的联合应用治疗大鼠括约肌损伤模型,发现温和灸15min联合局部注射BMSC可显著促进大鼠括约肌与血管新生,并能够加速肛压与括约肌肌电的恢复。温和灸与局部注射BMSC联合应用可加速恢复大鼠损伤肛门括约肌的结构和功能,为临床温和灸联合干细胞治疗肌源性大便失禁提供了方向。