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目的：卵巢癌（Ovarian cancer）是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于子宫颈癌和子宫内膜癌，但其病死率却占妇科肿瘤的首位，五年生存率仅约20-30%，对妇女生命造成严重威胁。卵巢癌的病因尚不清楚，由于缺乏早期诊断方法，就诊时大都已达晚期，其主要治疗手段为肿瘤细胞减灭术和化疗。但常因化疗耐药而导致卵巢癌复发、转移，导致治疗失败，甚至死亡。因此，寻找有效的抑制肿瘤生长的药物并研究其抗肿瘤机制成为目前卵巢癌治疗研究的发展方向。中药以其低毒、高效的优势受到国内外研究学者的广泛关注，从中草药中提取抗肿瘤成份成为获得有效抗癌制剂的重要途径。灵芝（Ganoderma Lucidum）作为拥有数千年药用历史的中国传统珍惜药材，具备很高的药用价值，经过科研机构数十年的现代药理学研究证实，灵芝对于增强人体免疫力，抑制肿瘤，保肝护肝，保护神经，调节血糖，降血脂，抗炎镇痛等方面均具有显著疗效。灵芝孢子（Ganoderma lucidum spore）是灵芝生长成熟期从菌盖弹射出来极其细小的种子，为灵芝的生殖细胞，是灵芝的精华部分，具有灵芝的全部遗传活性物质，其有效成分的含量高出灵芝75倍。目前，已有研究表明灵芝孢子在乳腺癌、宫颈癌、白血病、肝癌、胃癌等疾病中有抗肿瘤作用，在小鼠体内有拮抗环磷酰胺毒副反应的作用，其作为一种中药已经广泛应用于恶性肿瘤患者。近年，研究表明破壁灵芝孢子粉对人上皮性卵巢癌细胞具有抗癌作用，可以抑制卵巢癌细胞生长、侵袭和转移，诱导细胞凋亡，增强卵巢癌细胞对顺铂化疗的敏感性并能逆转人卵巢癌顺铂耐药细胞株对顺铂的耐药性。但对卵巢癌的体内研究还未见报道。本实验主要研究破壁灵芝孢子粉及其与紫杉醇化疗药物联合应用对人上皮性卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的影响，为灵芝孢子在上皮性卵巢癌的临床应用提供更完善的理论依据。方法：1细胞培养：常规培养人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞系SKOV3，用以建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型。2人上皮性卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立及实验分组：取对数生长期的SKOV3细胞用胰酶消化，10%胎牛血清终止消化，细胞充分分散后，置离心管中2000r/min（r=8cm）离心，5min弃上清，加入磷酸盐缓冲液（PBS）吹匀计数，再次离心，用PBS稀释成2.5×107个/ml单细胞悬液，于无菌条件下于裸鼠背侧近后肢处皮下接种，每只0.2ml（即5×106个）。接种后7天随机分成对照组、破壁灵芝孢子粉组、紫杉醇注射液组、破壁灵芝孢子粉+紫杉醇注射液联合用药组进行实验。3实验药物的制备：破壁灵芝孢子粉工作液制备：由加拿大energene天然药品有限公司提供的破壁灵芝孢子粉溶于双蒸水，配制成75mg/ml的灵芝孢子储存液。高温灭菌、离心后取上清，保存于4℃冰箱。紫杉醇注射液制备：用0.9%氯化钠注射液稀释成3mg/ml浓度，即刻使用。4给药方法：破壁灵芝孢子粉组按每只500mg/kg灌胃，每天一次，共4周。紫杉醇注射液组按每只30mg/kg腹腔注射，每周一次，共4次。联合用药组按每天500mg/kg破壁灵芝孢子粉灌胃，每周30mg/kg紫杉醇注射液腹腔注射。对照组每天灌胃相同体积0.9%氯化钠注射液，每周腹腔注射相同体积0.9%氯化钠注射液。5裸鼠重量及移植瘤体积和重量的测量：每天观察裸鼠精神、活动及大便情况，治疗第1、7、14、21、28天测量裸鼠体重和移植瘤的最长直径（a）和最短直径（b）。按公式V （mm3）=πab2/6计算移植瘤体积。按公式抑瘤率=（1－治疗组肿瘤体积/对照组肿瘤体积）×100%计算用药后第7、14、21、28天抑瘤率。停药24小时终止观察，处死裸鼠，剥取瘤组织，测量其体积并称重。6移植瘤组织HE染色：取部分瘤组织（小于5×5×1mm3）用4%多聚甲醛固定，观察移植瘤细胞学形态变化。7免疫组化技术检测移植瘤组织Bcl-2蛋白的表达：取部分瘤组织（小于5×5×1mm3）用4%多聚甲醛固定，用免疫组化技术研究移植瘤组织中Bcl-2的表达情况。8Q-PCR技术分析移植瘤组织miRNA200a的表达：取部分瘤组织置于-80℃冰箱保存，用Q-PCR技术分析移植瘤组织中miRNA200a的表达情况。9统计方法：采用SPSS13.0统计学软件对实验数据进行处理。计量资料以x±s表示，多样本均数间比较采用单因素方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。等级资料采用Kruskal-Wallis秩和检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。结果：1破壁灵芝孢子粉及紫杉醇注射液对裸鼠及移植瘤体积和重量的影响：四组裸鼠体重无明显差别，差异无统计学意义（P>0.05）。且未观察到裸鼠有精神萎靡、活动迟缓及腹泻等情况。第1天各组移植瘤体积无明显差异，差异无统计学意义。第7、14、21天用药组移植瘤体积小于对照组，但差异无统计学意义。第28天用药组移植瘤体积小于对照组，差异有统计学意义。紫杉醇注射液组与联合用药组抑瘤率从第7天随时间而呈上升趋势，破壁灵芝孢子粉组抑瘤率于14天后出现上升趋势。第28天联合用药组抑瘤率大于单纯用药组。处死动物后，称取移植瘤重量，用药组的移植瘤重量均小于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。2破壁灵芝孢子粉及紫杉醇注射液对移植瘤组织Bcl-2表达的影响：破壁灵芝孢子粉组、紫杉醇组和联合用药组移植瘤组织Bcl-2表达低于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。3破壁灵芝孢子粉及紫杉醇注射液对移植瘤组织miRNA200a表达的影响:破壁灵芝孢子粉组、紫杉醇注射液组及联合用药组裸鼠移植瘤组织miRNA200a表达均低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：1用药后第28天破壁灵芝孢子粉组移植瘤的体积及重量均小于对照组，且差异具有统计学意义，表明破壁灵芝孢子粉具有抑制肿瘤生长作用。2破壁灵芝孢子粉组移植瘤组织Bcl-2表达低于对照组，差异具有统计学意义，表明破壁灵芝孢子粉可能通过抑制Bcl-2，从而促进凋亡，发挥抑制肿瘤作用。3破壁灵芝孢子粉组移植瘤组织miRNA200a表达低于对照组，表明其可能通过抑制miRNA200a发挥抑制肿瘤作用。