论文部分内容阅读
背景:齐墩果酸（oleanolic acid,OA）是一种三萜类化合物,广泛存在于山楂、乌梅、女贞子等一些传统的中草药中,具有保肝、抗肿瘤和心血管系统保护等多种生物活性。OA在保肝作用方面主要体现于对血清转氨酶的降低,故临床上用于肝炎的护肝治疗[1],而对肝内胆汁淤积症的治疗还尚未有研究报道。胆汁酸摄取转运体（NTCP）、外排转运体（Bsep、Mrp2和Mrp3）、Ⅱ相代谢酶（UGT1A1、Sult2a1）以及核因子（FXR和Nrf2）参与了胆汁酸的转运和代谢,对缓解肝内胆汁淤积症具有重要意义。实验目的:本文旨在探索OA对肝内胆汁淤积症的作用以及其作用机制,为OA在临床上应用于肝内胆汁淤积症提供理论依据。实验方法:1、实验动物的分组和处理:将35只SPF级雄性大鼠（体重在180-220g）,用标准饲料和水进行1周的喂养。实验共有5组（n=7）,具体如下所示:（1）正常组;（2）ANIT组（3）OA（50mg/kg）预干预组;（4）OA（100mg/kg）预干预组;（5）UDCA预干预组。本实验中将预先给大鼠给药10天,在第10天对所有组别（除去空白组）的大鼠进行灌胃ANIT,ANIT单次急性造模要求大鼠给药前后都禁食12 h并在给药后48h进行取材。2、实验检测项目:（1）利用各种生化检测试剂盒对大鼠血清中ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL、TBA的含量进行检测;利用肝脏组织HE染色的来观察肝组织的形态和损伤程度。（2）采用Rt-qPCR技术检测肝组织中钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白（NTCP）、胆盐输出泵（Bsep）、多药耐药蛋白2（Mrp2）、多药耐药蛋白3（Mrp3）以及Ⅱ相代谢酶（UGT1A1、Sult2a1）的mRNA的表达水平。（3）采用Western-blot技术检测肝脏钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白（NTCP）、胆盐输出泵（Bsep）、多药耐药蛋白2（Mrp2）、多药耐药蛋白3（Mrp3）、Ⅱ相代谢酶（UGT1A1、Sult2a1）以及核因子（FXR、Nrf2）的蛋白表达水平。实验结果:1、ANIT可以显著增加大鼠血清ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL、TBA的含量,增加大鼠肝组织坏死和炎症反应;应用OA和UDCA预处理均能降低肝内胆汁淤积症大鼠血清ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL、TBA的含量,恢复肝组织正常形态并减少炎症反应,改善肝内胆汁淤积。此外OA的效果呈现剂量相关。2、OA可解除ANIT对胆汁酸摄取转运体（NTCP）、外排转运体（Bsep、Mrp2）和Ⅱ相代谢酶（UGT1A1、Sult2a1）的mRNA和蛋白的表达的抑制作用,促进胆汁酸的外排和代谢解毒,改善肝内胆汁淤积。此外,OA还可以上调Mrp3mRNA和蛋白来进一步缓解肝损伤,弥补机体自发适应性诱导的不足。3、OA可能通过激活FXR和Nrf2参与调控外排转运体（Bsep、Mrp2或Mrp3）的蛋白表达。结论:1、OA可以改善ANIT诱导的肝内胆汁淤积。2、OA通过调控胆汁酸的转运体和代谢酶的mRNA和蛋白的表达,增加胆汁酸的外排和代谢,改善ANIT诱导的肝内胆汁淤积。3、OA可能通过Nrf2和FXR参与胆汁酸外排转运体（Bsep、Mrp2或Mrp3）的调控。