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肿瘤干细胞的提出为肿瘤的形成、增殖、侵袭、转移和治疗提供了新思路。
目的:
通过检测人类多形性腺瘤的PLAG1转基因小鼠模型的肿瘤组织中相关标志物的表达,进行体内成瘤实验和致瘤机制的研究,揭示PLAG1转基因小鼠多形性腺瘤干细胞可能的致瘤机制。
方法:
1、总结多形性腺瘤PLAG1转基因小鼠成瘤特点,收集部分标本行免疫组化染色,检测肿瘤组织中相关标志物的表达。
2、收集42系转基因小鼠的肿瘤、成瘤前的正常颌下腺和野生型颌下腺细胞,流式检测其中CD44、CD133和CD117的表达,选择5只42系肿瘤小鼠注射BrdU,用BrdU掺入方法检测细胞增殖分裂活性。
3、利用相关标志物CD44hi或CD44hiCD133+CD117+分选42系小鼠模型肿瘤细胞,进行体内成瘤实验。
4、将带有荧光素酶的Egr-1启动子片段和PLAG1的质粒共转NIH3T3细胞,观察荧光素酶活性。
结果:
1、9系、42系和104系的繁殖后代临床特点、组织病理学和建立初期类似,仍可模拟人类多形性腺瘤,但有恶性倾向,免疫组化染色发现肿瘤组织中CD44、CD133、CD117、Egr-1、c-Myc、Cyclin D1表达明显较瘤旁和正常组织增强。
2、流式检测发现42系肿瘤细胞中CD44较正常颌下腺细胞表达增加,若将CD44染色细胞分为3侧亚群,CD44hi、CD44int和CD44neg,则CD44hi侧亚群细胞在肿瘤细胞所占比例约8.62%,平均荧光强度为89.59,明显高于转基因未成瘤小鼠和正常野生型颌下腺细胞(P<0.05),而CD44hi侧亚群中CD133和CD117共染细胞的百分比明显较CD44neg在细胞侧亚群高,有明显差异(P<0.05)。
3、42系成瘤小鼠BrdU实验和CD44染色发现在观察时间内BrdU染色的CD44hi细胞较CD44neg的细胞数量明显减少。
4、42系体内成瘤实验发现C57BL/6野生型小鼠皮下注射经过CD44hi分选下来的肿瘤细胞500个即可成瘤。
5、Egr-1启动子和PLAG1的质粒共转染实验发现随着PLAG1浓度增加,荧光素酶活性增强。
结论:
1、PLAG1转基因小鼠的颌下腺肿瘤模拟了人类多形性腺瘤,但有恶性倾向。
2、42系PLAG1转基因小鼠模型表达CD44hi的肿瘤细胞较正常颌下腺细胞多,且其中BrdU+的着色细胞少提示在观察时间内CD44hi的细胞较CD44neg增殖分裂活性差,而CD44hi的细胞中CD133和CD117共染细胞数较CD44neg侧亚群的高,提示CD44hi可能是肿瘤干细胞的一个标志。
3、CD44hi分选的细胞的体内致瘤性揭示C57BL/6野生型小鼠可以作为移植瘤模型,CD44hi是PLAG1转基因小鼠肿瘤干细胞的一个表面标志。
4、PLAG1对Egr-1启动子的激活揭示PLAG1可能间接通过此通路激活了CD44的表达。