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目的:1.观察培养的人肾小球足细胞(human glomerular podocyte)形态学,掌握细胞培养的基本操作过程。2.观察来氟米特活性代谢产物A771726对高糖诱导足细胞凋亡影响,探讨来氟米特对足细胞损伤的保护作用及可能的机制。方法:实验中应用的足细胞是一种温度敏感型永生化人足细胞系。细胞复苏后在含1%ITS、10%胎牛血清的1640培养液中,33℃、5%CO2条件下传代增生,细胞呈鹅卵石状,之后转入37℃、5%C02培养箱培养两周,使其进入成熟分化状态,待细胞生长融合约至70%-80%时,换无血清RPMI-1640培养液培养24h,待细胞生长同步后分组。将足细胞分为正常糖组、甘露醇高渗对照组、高糖组、高糖+SB202190(p38MAPK通路特异性抑制剂)组及高糖+A771726(来氟米特活性代谢产物)组。Western印迹检测足细胞p38MAPK及磷酸化p38MAPK(p-p38)活性;流式细胞仪检测各实验组足细胞凋亡率。结果:1.我们检测到高糖刺激足细胞在10min时p38MAPK信号通路即开始活化,p-p38蛋白表达增加,30min达高峰,6h接近基础水平;而正常糖组和高渗对照组仅有极少量p38活化;应用p38MAPK信号通路特异性阻断剂SB202190可明显降低高糖刺激引起的p-p38蛋白表达,来氟米特活性代谢产物A771726亦可减少同一时间点高糖刺激引起的p-p38蛋白表达。2.流式细胞仪检测到高糖刺激24h以上可见明显细胞凋亡,24h凋亡率为(12.3±0.96)%,48h为(18.6±0.70)%,以48h凋亡最为明显,显著高于正常糖组及甘露醇高渗对照组。p38MAPK特异性抑制剂SB202190组48h足细胞凋亡率为(13.4±0.85)%,较高糖48 h组下降26%;来氟米特活性代谢产物A771726可以减轻高糖诱导的足细胞凋亡,20μmol/L来氟米特活性代谢产物A771726干预48h后足细胞凋亡率为(15.5±1.19)%,较高糖组下降17%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:来氟米特活性代谢产物A771726能够减少高糖所致的足细胞凋亡,机制可能与其抑制p38MAPK活化相关。