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目的:桂枝茯苓胶囊(Guizhi Fuling Capsule,GZFLC)是临床上治疗子宫肌瘤的常用中药之一,但是目前关于GZFLC治疗子宫肌瘤的作用机制尚不明确。本研究通过观察GZFLC含药血清对体外培养子宫平滑肌瘤细胞增殖和凋亡的影响,探讨其作用机制,为临床上子宫肌瘤的有效药物治疗提供新思路。 方法:(1)取SD大鼠60只随机分为生理盐水灌胃组和GZFLC灌胃组,分别制备空白血清和GZFLC含药血清。(2)用胶原酶消化法原代培养子宫平滑肌瘤细胞,用免疫细胞化学染色SP法进行细胞鉴定。(3)检测细胞增殖活性及抑制率:不同浓度GZFLC含药血清(10%,20%,30%)作用不同时间(12h,24h,36h,48h,72h),用CCK8法检测细胞增殖活性及抑制率。(4)检测细胞凋亡率:20%GZFLC含药血清分别作用不同时间(12h,24h,36h,48h,72h),运用AnnexinⅤ-FITC/PI双标记流式细胞仪检测细胞凋亡来选取药物最佳作用时间;在最佳作用时间下,加入不同浓度GZFLC含药血清(10%,20%,30%),用流式细胞仪检测细胞凋亡来确定最佳含药血清浓度。(5)选取细胞凋亡率最佳组提取蛋白,通过蛋白质印迹法(Western blot)分析GZFLC含药血清对子宫肌瘤细胞凋亡相关的14-3-3γ通路上14-3-3γ及其下游TSC2和FOXO蛋白表达的影响。 结果:(1)在10%~30%浓度范围内,GZFLC含药血清浓度越高,细胞抑制率越高;不同浓度GZFLC含药血清均在36h时间点抑制率达高峰,此后呈衰减趋势,72h后出现促增殖作用。(2)细胞凋亡率有剂量依赖性,在10%~30%浓度范围内,细胞凋亡率随含药血清浓度升高而升高;GZFLC含药血清作用12h时凋亡率达高峰,随后下降,36h时间点再次出现凋亡高峰。(3) GZFLC含药血清作用后子宫肌瘤细胞TSC2、FOXO、14-3-3γ的表达均有显著性差异。 结论:GZFLC含药血清能有效抑制子宫平滑肌瘤细胞增殖,并诱导肌瘤细胞凋亡,其诱导细胞凋亡与14-3-3γ通路相关。