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脓毒症(sepsis)系病原微生物入侵机体后所致的全身性炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome，SIRS)。机体促炎症反应和抗炎症反应间的不平衡是其发生、发展的病理生理基础，重症脓毒症(severe sepsis)、脓毒性休克(septic shock)及多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome，MODS)是脓毒症的后续症。2001年美国疾病控制中心的调查统计结果显示：在美国，每年大约有75万人并发重症脓毒症，21.5万人死于脓毒症及其后续症，平均死亡率为28.6％，而年龄高于85岁的老年患者的死亡率则高达38.4％，脓毒症已成为老年人十大死因之一，每年投入脓毒症的医疗费用高达170余亿美元。在我国，随着经济发展和科技进步，尤其是先进医疗技术的采用，如有创监测、免疫抑制剂使用和抗生素的不规范使用、人口老龄化等，多发伤、严重创伤、烧伤、外科大手术后脓毒症、重症脓毒症、MODS的患病率及死亡率与国外报道一致。因此，为了能够个性化用药，达到提高临床疗效、降低患者死亡率、节约医疗资源的目的，研究脓毒症的发病机制具有十分重要的意义。1996年Stuber教授在国际上首次报道了“遗传变异与脓毒症发生、发展的相关性研究”结果——肿瘤坏死因子NCoI多态性和患者机体肿瘤坏死因子(TNF)的水平与脓毒症发生器官功能障碍的可能性及预后显著相关。自此，在国际危重病医学研究领域中，基因变异(如第一代遗传标志RFLP、第二代遗传标志VNTR和微卫星等)与脓毒症发生、发展及预后的相关性研究十分活跃。目前，研究已发现TNF、Toll样受体和PAI-1等免疫分子、炎性介质均与脓毒症的发生、发展及预后有相关性。人防御素(Human Defensin)是近年发现的小分子阳离子多肽，在先天性免疫及获得性免疫中发挥着重要的作用，已引起国内外医学生物学研究者的日益重视。有研究报道β防御素—1(Humanβ-Defensinl，HBD1)的基因多态性与某些感染及感染相关性疾病的易感性相关，如COPD、HIV等。最近有研究表明，分析多态性位点构成的单倍型比单个位点的关联分析能更有效地发现与疾病关联的位点，通过单倍型分析可以发现与疾病易感性相关的核苷酸多态性。本研究检测了HBD1的单核苷酸多态位点，对其单倍型进行了分析，阐述其与脓毒症的易感性及预后的相关性。研究目的分析汉族人群HBD-1单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms，SNPs)的单倍型，研究HBD-1单倍型与脓毒症发生发展的相关性。方法经受试者(共435人，患者组268例，对照组167例)知情同意后各抽取外周静脉血10ml，以2％乙二胺四乙酸二钠(EDTA)抗凝，用QIAamp DNA Blood Mini试剂盒(QIAGEN公司)提取DNA。选择可能影响HBD-1基因的转录或改变蛋白的结构进而影响蛋白的构象和功能的位点：启动子区-1816A／G(rs2741136)、-390A／T(rs2738182)，5’非编码区-52A／G(rs1799946)、-44C／G(rs1800972)、-20A／G(rs11362)及第二外显子中非同义SNP—1654G／A(rs2738047)。其中，-1816A／G(rs2741136)、-52A／G(rs1799946)、-44C／G(rs1800972)、-20A／G(rs11362)的测定采用PCR扩增DNA片段后DNA直接测序的方法，-390A／T(rs2738182)基因型检测采用PCR-ASA的方法，1654G／A(rs2738047)采用TaqMan检测其基因型。计算基因型和等位基因频率，用Haploview程序分析配对位点的连锁不平衡(Linkage disequilibrium，LD)关系，并计算它们构成的单倍型频率。结果1、HBD1基因单核苷酸多态性及基因型和等位基因频率的分布第二外显子中非同义1654G／A均为纯合子G／G，启动子区-1816A／G、-390A／T和5’UTR-52A／G、-44C／G、-20A／G位点均检测到三种基因型。两组病例中，5个多态性位点的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡，P值均大于0.05。病例组和对照组之间-20A／G、-44C／G位点的基因型频率和等位基因频率的差异有统计学意义(P＜0.05)，死亡组和存活组之间-44C／G、-1816A／G位点的基因型频率和等位基因频率的差异有统计学意义(P＜0.05)。2、连锁不平衡分析分别计算病例组和对照组及死亡组和存活组两两位点之间的连锁不平衡系数D值，发现某些位点之间存在较强的连锁不平衡。病例组和对照组的-20A／G、-44C／G、-52A／G之间、-20A／G与-1816A／G和-390A／T之间、-52A／G与-390A／T之间及-44C／G与-1816A／G之间的D值均大于0.7，表明存在紧密的连锁不平衡，其余各位点间的连锁不平衡较弱或基本达到连锁平衡。死亡组和存活组的-20A／G与-52A／G和-390A／T之间、-52A／G与-390A／T之间的D′值均大于0.7，-44C／G与-52A／G和-1816A／G之间D′值在死亡组大于0.7、而在存活组则接近0.7(分别为0.64和0.67)。因此，病例组与对照组之间及死亡组与存活组之间的两两连锁不平衡情况基本相似。3、汉族人群的单倍型分析对5个单核苷酸多态性位点所构建的单倍型进行分析，结果在对照组中共发现H1—H7七种常见(频率大于1％)的单倍型，其中H1和H2为主要单倍型(频率大于10％)。4、单倍型与脓毒症的相关性比较七种常见单倍型在病例组和对照组及死亡组和存活组之间的分布情况发现：H2、H3和H6在病例组和对照组之间的差异具有统计学意义(P＜0.05)，H2和H6在对照组的频率高于病例组，而H3在病例组的频率为10.7％，对照组6.7％；H3在死亡组13.0％，在存活组为4.2％，H3在死亡组的频率明显高于存活组(P＜0.05)。结论本研究发现在汉族人群中存在H1、H2、H3、H4、H5、H6、H7七种常见单倍型，其中H3，即—20G／—44G／—52G／—390T／—1816G可能与汉族人群脓毒症的易感性及预后相关。