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目的目前糖尿病发病率逐年上升,作为糖尿病最常见也是最严重的微血管并发症之一的糖尿病肾病,其发病率也随之增加,这不仅影响患者生活质量,加重社会及家庭经济负担,且已威胁患者生命,因此如何有效延缓其发生发展具有十分重要的意义。近年来,许多中药被发现有降低血糖作用,黄连解毒汤及其有效成分小檗碱就是其中之一,研究证实小檗碱通过减轻糖尿病肾病肾小球硬化、降低尿微量白蛋白排泄作用及减轻肾小管间质病变等方式延缓糖尿病肾病进展,但关于黄连解毒汤对肾脏影响方面研究较少,且黄连解毒汤相较小檗碱有效成分更多,且各成分之间存在相互作用,不良反应也较少。因此本研究选用自发2型糖尿病ZDF大鼠(Zucker Diabetic Fatty rat,fa/fa)作为研究对象,在高脂喂养下诱导为DM模型,分别予黄连解毒汤及小檗碱药物进行干预,以观察两者在治疗糖尿病过程中对肾脏的影响以及两者间是否存在疗效差异。方法SPF级雄性ZDF大鼠30只,予高脂饲料喂养,诱导为DM模型后随机以每组10只分为模型组、黄连解毒汤干预组(黄连组)及小檗碱干预组(小檗碱组)。另将5只正常的ZL(Zucker Lean rats,fa/+)大鼠作为正常组对照。其中,黄连组以黄连解毒汤0.075g/d,小檗碱组以100mg/kg/d灌胃干预,模型组和正常组以等量双蒸水灌胃对照。药物干预6周作为实验终点并处死取材。实验过程中,记录不同时期大鼠血糖、体重,留取24小时尿液检测24小时尿蛋白定量(24h UTP),处死前留取血标本检测血脂及肾功能,ELISA法测定空腹血浆胰岛素(INS),并以HOMA-IR指数评价胰岛素抵抗程度,留取尿液检测N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β-半乳糖苷酶(GAL)、β2-微球蛋白(β2-MG);处死后留取肾组织标本,HE染色及电镜下观察大鼠肾组织肾小球及肾小管病理结构改变。结果1.一般指标:随病程进展,模型组ZDF大鼠空腹血糖及体重逐渐升高;药物干预6周后,模型组与正常组相比空腹血糖(P<0.01)、体重(P<0.01)、空腹胰岛素水平(P<0.01)、胰岛素抵抗程度(P<0.01)及血脂包括总胆固醇(TC)(P<0.01)、甘油三酯(TG)(P<0.01)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)(P<0.05)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)(P<0.01)方面均显著升高;与模型组相比,黄连组及小檗碱组空腹血糖水平(P<0.01)、胰岛素抵抗程度(P<0.01)及血脂TC(P<0.05)、TG(P<0.05)显著下降,体重及LDL-C、HDL-C略有下降,但无统计学差异(P>0.05),空腹胰岛素水平方面,小檗碱组下降明显(P<0.01),黄连组也有所下降,但差异无统计学意义(P>0.05)。2.肾结构检测指标:1)24小时尿蛋白定量:随病程进展,模型组24h尿蛋白定量(24h UTP)呈逐渐上升趋势,药物干预6周后,模型组24h UTP较正常组明显升高(P<0.01),黄连组与小檗碱组均较模型组显著下降(P<0.01)。2)肾小管生化指标:药物干预6周后,模型组NAG、GAL水平较正常组均显著升高(P<0.01),黄连组与小檗碱组GAL(P<0.05)较模型组明显下降,NAG黄连组下降更明显(P<0.05),小檗碱组略有下降(P>0.05);尿β2-MG在四组间无显著差异(P>0.05)。3.肾功能:药物干预6周后,模型组尿素氮(BUN)较正常组明显升高(P<0.01),而血肌酐(Scr)显著下降(P<0.01);与模型组相比,黄连组及小檗碱组BUN水平有所下降,但无统计学差异(P>0.05),Scr无明显差异(P>0.05)。4.肾脏组织病理结构:1)光镜HE染色:正常组肾小球、肾间质及肾小管组织结构正常。模型组大鼠肾小球局部结构破坏,肾小球可见硬化,肾小管上皮细胞可见坏死,管腔变小萎缩。黄连组与小檗碱组肾小球、肾间质组织结构尚可,肾小球未见硬化,肾小管上皮细胞未见坏死,部分管腔变小。2)电镜下观察肾脏超微结构:正常组大鼠肾小球及肾小管结构形态未见明显异常。模型组相较于正常组肾小球滤过膜节段性增厚,结构模糊不清,足突局灶性融合、破坏,近曲小管上皮细胞空泡化,迷路结构不清晰,线粒体结构不清晰,细胞内有较多的溶酶体颗粒,部分肾小管细胞核缩小,呈凋亡样改变。黄连组与小檗碱组观察到滤过膜及近曲小管结构较模型组明显改善。结论1.黄连解毒汤及小檗碱可降低ZDF大鼠的血糖、血脂及胰岛素水平、胰岛素抵抗程度,改善大鼠一般状况。2.黄连解毒汤和小檗碱均可降低模型组大鼠24小时尿蛋白、尿NAG、GAL及血尿素氮水平,并改善肾小球及肾小管病理结构,从而对肾脏产生保护作用,预防DKD发生发展。3.黄连解毒汤与小檗碱相比除在降低NAG方面作用略强外,其余在改善模型组大鼠24小时尿蛋白、GAL、β2-MG、肾功能及肾小球、肾小管病理结构方面无明显差异,显示黄连解毒汤与小檗碱可同样对肾脏具有保护作用,推测可进一步预防DKD发生发展。