目的:探索不同中医治法防治肝癌的作用机制,深入研究大鼠肝癌中被行气活血治法下调的干扰素相关发展调节因子1(IFRD1)体外对SMMC-7721细胞恶性增殖的作用机制。　　 方法：　　 (1)在课题组前期发现行气活血等常用中医治法调节DEN(二乙基亚硝胺)诱发大鼠肝癌组织多基因差异表达工作的基础上,根据基因芯片数据,挑选大鼠肝癌组织中高表达且不同中医治法有调节作用的基因,根据BLAST比对结果,以大鼠与人对应的同源基因为研究对象;根据siRNA设计原则与方法,利用在线软件筛选各基因干扰靶点,设计插入片段的DNA序列并合成,然后构建目的基因siRNA的表达载体;应用阳离子脂质体转染法将上述重组质粒转染入人肝癌SMMC-7721细胞株,观察目的基因RNA干扰(RNAi)后该细胞发生的生物学改变来研究基因的功能;MTT法检测转染后细胞增殖变化情况,倒置相差显微镜观察转染后质粒在细胞内的表达及基因表达沉默后肝癌细胞形态学的变化,RTqRCR检测目的基因mRNA水平,初步判断这些基因在肝癌细胞恶性增殖中的作用。　　 (2)选择以上筛选出来具有促进人肝癌细胞SMMC-7721增殖的基因IFRD1,采用U133 Plus GeneChip检测该基因RNAi前后SMMC-7721细胞基因表达谱变化;利用相关软件进行分析,籍此以分析该基因在肝癌发生、发展中的作用,重点分析其对细胞生长增殖相关通路的影响。　　 (3)采用脂质体包裹IFRDI siRNA直接转染SMMC-7721细胞,观察其不同时间和不同剂量的siRNA干扰后的细胞增殖情况,并综合采用RTqRCR等技术,观察该基因降解程度及验证该基因干扰对若干与细胞周期有关基因的调节作用。　　 结果：　　 (1)根据BLAST比对结果,确定了16个人/大鼠同源基因为研究对象,并依据目的基因cds区各构建3个pSilencer2.1-siRNA干扰载体,经测序验证共得到46个重组质粒。成功将这些重组质粒经脂质体转染入SMMC-7721细胞,经多次重复实验和RTqRCR验证,发现IFRD1、Vim、Krt18、Anxa2等4个基因具有促进SMMC-7721细胞恶性增殖的作用。　　 (2)pSilencer2.1-IFRD1 siRNA表达载体脂质体包裹转染SMMC-7721细胞,采用U133 Plus GeneChip检测,发现RNAi后SMMC-7721细胞出现大量差异表达的基因,对细胞周期通路的改变主要表现在S期DNA合成受阻、DNA复制相关通路中复制起始和延长阶段相关因子均以下调为主,转录起始亦受到抑制。　　 (3)采用脂质体包裹IFRD1 siRNA转染SMMC-7721细胞,观察到近似的IFRD1降解现象,但对若干与细胞周期等通路基因的调节作用与pSilencer2.1-IFRD1 shRNA表达载体结果有所异同。　　 结论：　　 (1)在DEN诱导大鼠肝癌高表达的基因中,IFRD1等4个基因与SMMC7721肝癌细胞恶性增殖密切相关。　　 (2)IFRD1基因RNA干扰后导致肝癌细胞增殖抑制的机理,可能是通过调控某些基因的转录,及抑制DNA复制和转录起始等通路相关基因的表达,从而引起细胞阻滞于S期实现的。　　 (3)本研究有助于加深认识中医不同治法在肝癌基因表达调控方面的作用机制,丰富肝癌发生与防治的分子机理,而且对今后肝癌防治筛选分子靶点有所裨益。