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研究目的:凝溶胶蛋白(gelsolin,GSN)作为一种肌动蛋白结合蛋白,参与了多种细胞的生命活动进程,并与创伤、脓毒症、免疫及炎症等病理生理过程密切相关,其在机体血浆中含量的下降与重度烧创伤和脓毒症患者死亡率与升高有关。为了进一步探究脓毒症的相关发病机制,了解GSN的变化规律,加深对脓毒症病理生理进程的认识,在免疫调控方面探寻新的靶点。本课题试图通过GSN在体内干预重度烧伤小鼠,观察其变化规律及对脾脏T淋巴细胞免疫功能方面可能存在的影响,在调控机制方面了解GSN干预作用的可能的机制,以期在临床脓毒症患者的治疗方面探寻新的途径和可能。研究方法:实验一:取80只雄性BALB/c小鼠,按随机数字表法分为假伤组和烧伤组,每组40只,n=8。烧伤组小鼠造成背部15%TBSAIII度烫伤(下称烧伤),伤后即刻皮下注射生理盐水1ml,背部涂适量碘伏防止感染,每日1次。假伤组小鼠致假伤,伤后不补液、不外涂碘伏。分别于伤后0(即刻)、8、24、48、72h,每组各取8只小鼠,无菌留取脾脏,噻唑蓝比色法检测脾脏T淋巴细胞增殖活性,ELISA法检测脾脏组织中GSN含量,实时荧光定量RT-PCR法检测脾脏组织中GSN mRNA表达。实验二:取150只雄性BALB/c小鼠,按随机数字表法分为正常对照组(A)、假伤组(B)、烧伤组(C)、低剂量给药组(D)、高剂量给药组(E),每组30只,n=6。低剂量给药组和高剂量给药组分别在伤后即刻给予GSN 0.05mg(0.1ml)/只、0.5mg(0.1ml)/只。分别于伤后0(即刻)、8、24、48、72h,每组各取6只小鼠,无菌留取血清、脾脏、肝脏,ELISA法检测血清、脾脏、肝脏组织中GSN含量,实时荧光定量RT-PCR法检测脾脏、肝脏组织中GSN mRNA表达。死亡率试验动物分组:取120只雄性BALB/c小鼠,按随机数字表法分为假伤组(B)、烧伤组(C)、低剂量给药组(D)、高剂量给药组(E),每组30只,C组、D组、E组伤后8h再皮下注射理盐水1ml,观察并记录动物死亡时间至伤后168h。实验三:取150只雄性BALB/c小鼠,按随机数字表法分为正常对照组(A)、假伤组(B)、烧伤组(C)、低剂量给药组(D)、高剂量给药组(E),每组30只,n=6。分别于伤后0(即刻)、8、24、48、72h,每组各取6只小鼠,无菌留取脾脏。噻唑蓝比色法检测脾脏T淋巴细胞增殖活性,ELISA法检测脾脏IL-2、IL-4和IFN-Y。研究结果:实验一:假伤组小鼠伤后8、24、48、72h脾脏T淋巴细胞增殖活性、脾脏组织中GSN含量及脾脏组织中GSN mRNA表达量均显著高于烧伤组(P值均小于0.05)。烧伤组小鼠伤后8h脾脏T淋巴细胞增殖活性为0.117±0.036,显著低于组内伤后 0、24、48、72h 的 0.728士0.067、0.563±0.069、0.506±0.009、0.593±0.069(P值均小于0.05);烧伤组小鼠伤后8h脾脏组织中GSN含量(11.25±5.281)pg/mg,显著低于组内伤后 0、24、48、72h 的(37.74±2.858)、(19.98±6.233)、(24.68±7.336)、(24.59±5.077)pg/mg(P值均小于0.05);烧伤组小鼠伤后8h脾脏组织中GSN mRNA表达量为 0.307±0.064,显著低于组内伤后 0、24、48、72h 的 0.936±0.123、0.625±0.091、0.744±0.104、0.821±0.072(P值均小于0.05)。烧伤组小鼠伤后0、8、24、48、72h脾脏GSN含量和GSN mRNA表达均与T淋巴细胞增殖活性呈显著正相关(P值均小于0.05)。实验二:假伤组小鼠伤后8、24、48、72h血清GSN含量、脾脏组织GSN含量及mRNA表达、肝脏组织GSN含量及mRNA表达均显著高于烧伤组、低剂量组和高剂量组(P值均小于0.05)。烧伤组小鼠伤后8、24、48、72h血清GSN含量、脾脏组织GSN含量及mRNA表达、肝脏组织GSN含量及mRNA表达均显著低于高剂量组(P值均小于0.05)。高剂量组小鼠伤后8h血清GSN含量(851±32)pg/mg、伤后48h血清GSN含量(956±87)pg/mg显著高于低剂量组的(662±67)、(803±197)pg/mg(P值均小于0.05)。高剂量组小鼠伤后8、24h脾脏和肝脏组织GSN含量及mRNA表达均显著高于低剂量组(P值均小于0.05)。重度烧伤导致小鼠死亡发生在伤后72小时内,烧伤组和低剂量组小鼠死亡率均为70%,均显著高于高剂量组(43.33%)(P值均小于0.05),烧伤组小鼠伤后72h内生存时间(19.86±15.47)h显著低于低剂量组(30.76±18.46)h(P<0.05)。实验三:假伤组小鼠伤后8、24、48、72h脾脏T淋巴细胞增殖活性显著高于烧伤组、低剂量组和高剂量组(P值均小于0.05)。烧伤组小鼠伤后8、24、48、72h脾脏T淋巴细胞增殖活性和低剂量组无显著差异(P值均大于0.05),烧伤组小鼠伤后8、24h脾脏T淋巴细胞增殖活性显著低于高剂量组(P值均小于0.05)。烧伤组小鼠伤后8、24、48h脾脏T淋巴细胞分泌IL-2低于假伤组、低剂量组和高剂量组(P值均小于0.05),假伤组小鼠伤后8h脾脏T淋巴细胞分泌IL-2高于低剂量组和高剂量组(P值均小于0.05),高剂量组小鼠伤后0、8、24、48、72时脾脏T淋巴细胞分泌IL-2和低剂量组无显著差异(P值均大于0.05)。烧伤组小鼠伤后8、24、48、72h脾脏T淋巴细胞分泌IL-4显著高于假伤组(P值均小于0.05)、分泌IFN-γ和比值(IFN-γ/IL-4)显著低于假伤组(P值均小于0.05)。低剂量组小鼠伤后0、8、24、48、72h脾脏T淋巴细胞分泌IL-4和烧伤组无显著差异(P值均大于0.05),伤后8、24、48h脾脏T淋巴细胞分泌IFN-γ显著高于烧伤组(P值均小于0.05),伤后8h 比值(IFN-γ/IL-4)显著高于烧伤组(P<0.05)。高剂量组小鼠伤后8、24h脾脏T淋巴细胞分泌IL-4显著低于烧伤组和低剂量组(P值均小于0.05),伤后8、24、48h脾脏T淋巴细胞分泌IFN-γ的量和比值均显著高于烧伤组(P值均小于0.05)。研究结论:实验一:重度烧伤导致小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性、GSN含量及基因表达下降,GSN含量和GSN mRNA表达均与T淋巴细胞增殖活性呈显著正相关,且三者均是在伤后8 h降至最低,可选择伤后8 h之前作为重度烧伤后GSN干预治疗的最佳时间点。实验二:重度烧伤后出现GSN大量消耗,GSN干预能够显著降低重度烧伤小鼠的死亡率,并延长存活时间;GSN的干预效果与剂量有关,高剂量GSN能够显著抑制重度烧伤导致的血清GSN含量、脾脏和肝脏GSN含量及GSN mRNA表达的下降,其干预效果显著优于低剂量组。实验三:小鼠在重度烧伤后引起免疫抑制作用,GSN对这种抑制作用能够显著减轻,在脾脏T淋巴细胞功能分化方面,能够促进向免疫功能亢进的1型T辅助细胞方向漂移,说明GSN能够促进重度烧伤后免疫功能状态的改变。