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蓝莓果实中富含花青素,因而具有极高的保健价值和经济价值。通过转录因子调控目的基因表达是植物调控生长发育及生理代谢的一种重要方式。MYB和NF-Y是植物中非常重要的转录因子,近年来,植物中许多MYB家族基因被证实参与花青素生物合成调控,但NF-Y是否参与参与该过程及其具体的调控机制尚不清楚。本研究从蓝莓中分离鉴定出1个NF-YC基因和3个MYB基因,分别命名为VcNF-YC9和VcMYB3、VcMYB5、VcMYB21。通过酵母双杂交实验确立 VcNF-YC9 和 VcMYB3、VcMYB5、VcMYB21相互关系后,在蓝莓果实中进行VIGS基因沉默和瞬时过表达实验鉴定基因的功能。具体结果如下:1、利用酵母双杂交实验检测VcNF-YC9、VcMYB3、VcMYB5和VcMYB21特性及蛋白之间的相互关系。结果显示,VcMYB5蛋白具有强烈的自激活活性,VcMYB21蛋白能形成自身同源二聚体,VcNF-YC9分别与VcMYB3、VcMYB5、VcMYB21蛋白互作。2、利用荧光定量 PCR(RT-qPCR)技术对VcMYB3、VcMYB5、VcMYB21和VcNF-YC9基因在蓝莓各组织及相应UV胁迫下的表达变化进行检测分析,结果显示VcMYB3、VcMYB5、VcMYB21和VcNF-YC9基因在蓝莓果皮中表达量最高,且显著高于在其他组织中的表达量。其中VcMYB21基因在蓝莓叶片中的表达量仅次于在蓝莓果皮中的表达量,且显著高于除果皮之外的其他组织。当用紫外光UV-B处理蓝莓叶片时,VcMYB21基因均呈上升后下降的表达趋势,并且伴随着基因表达量的下降,花青素迅速积累。暗示着VcMYB3、VcMYB5、VcMYB21和VcNF-YC9基因可能在花青素生物合成中起调控作用,其中VcMYB21基因可能负调控花青素的生物合成。3、检测蓝莓VcMYB3、VcMYB5、VcMYB21和VcNF-YC9基因在不同果实发育时期表达量变化,包括小绿果、绿果、白果、半红果、全红果和紫果七个时期。结果显示,VcMYB5基因在果实发育不同时期表达量无显著差异;VcMYB3基因在小绿果时期表达量最高,在绿果和白果期迅速下降但随后在红果期表达量上升到小绿果时期的水平;VcMYB21和VcNF-YC9基因均在小绿果时期的表达量最高,且显著高于其他时期,在半红果和全红果时期略微上升,但上升并不显著。4、VcNF-Yc9和VcMYB3、VcMYB5、VcMYB21基因单独或每对互作蛋白共同进行VIGS沉默实验,结果显示,基因沉默后,蓝莓果实成熟期提前并且蓝莓果肉由青转红;在蓝莓果皮和果肉中,特别是果肉中相应基因的表达量均显著低于正常水平;花青素合成途径中的相关基因在蓝莓果肉中的表达量也呈现显著上升的趋势,但是不同转录因子VIGS后对应花青素生物合成途径中相关基因变化最显著的各有差异;花青素含量,特别是在蓝莓果肉中,显著高于对照组。5、VcNF-YC9和VcMYB21/5/3基因单独或每对互作蛋白在蓝莓果实中共同进行过表达实验,结果显示,基因过表达后,蓝莓果实成熟期延长并且蓝莓果肉由青变白;在蓝莓果皮和果肉中,特别是果肉中相应基因的表达量均显著高于正常水平;花青素合成途径中的相关基因的表达量在蓝莓果肉中也呈现显著下降的趋势;花青素含量,特别是在蓝莓果肉中,显著低于对照组。证明VcMYB3、VcMYB5、VcMYB21和VcN和F-YC9基因在蓝莓花青素生物合成中起到重要的负调控作用。6、生理指标测定结果显示,VIGS基因沉默或过表达试验后的蓝莓果实中多酚、类黄酮含量与正常蓝莓中的含量无显著差异;可溶性糖含量测定结果显示VIGS基因沉默或过表达试验后的蓝莓果实相对于对照蓝莓果实蔗糖含量有下降趋势但不显著,而单糖含量略微上升,但上升趋势不显著。7、实验测了脱落酸、水杨酸、油菜素内酯、茉莉酸和生长素,结果显示处理后的蓝莓果实与对照组相比,激素含量水平无显著差异。