论文部分内容阅读
研究目的:竹节香附素A (Raddeanin A, RA),是中药银莲花的一种三萜类提取物。本课题组前期体外实验研究发现:RA对多株胃癌细胞具有诱导凋亡和抑制侵袭的作用,而其中的作用机制尚不能完全明确。此外在理论研究中我们发现,自噬也可能是抗肿瘤机制之一,因而本课题组拟研究其对胃癌细胞自噬的影响及其机制,进一步探讨RA诱导的自噬和凋亡的相互关系。研究方法:1采用MTT法,观察RA对三株不同分化程度的胃癌细胞(SGC-7901,SNU-1, HGC-27)的增殖抑制作用。2采用流式细胞术(Flow cytometry, FCM)和Hoechst 33258染色实验,观察RA对胃癌细胞凋亡比例和染色质形态的影响。3采用透射电镜,观察RA诱导胃癌细胞自噬体形成。4采用Western blotting实验,观察RA对凋亡、自噬以及p38 MAPK通路蛋白表达的影响。5采用公认地自噬抑制剂羟氯喹和自噬激动剂雷帕霉素,分别调控自噬后,再次观察对RA诱导的胃癌细胞凋亡、以及自噬的影响。研究结果:1 MTT实验提示,RA能高效地抑制三株胃癌细胞增殖,并呈现良好地剂量依赖性。2 FCM和Hoechst 33258染色实验结果证实了:RA能诱导三株胃癌细胞凋亡。而且,FCM结果提示RA诱导的细胞凋亡,呈现良好地量效关系。3透射电镜发现,中剂量的RA能诱导胃癌细胞形成自噬体。4 Western blotting实验从蛋白层面提示了,RA能剂量依赖性地促进胃癌细胞凋亡、自噬,并能够剂量依赖的激动p38 MAPK信号通路,进一步地抑制mTOR信号通路。5羟氯喹(Hydroxychloroquine,HCQ)、雷帕霉素(Rapamycin, Rap)能够在胃癌细胞中起到自噬调节剂的作用。接着我们在FCM检测中发现,HCQ和Rap本身并不能影响细胞凋亡状态。有趣的是,HCQ能抑制细胞自噬,同时增强RA诱导的细胞凋亡作用。Western blotting实验,从蛋白层面也佐证了这些改变。我们认为,抑制自噬可以增强RA诱导胃癌细胞凋亡的药理作用。研究结论:1 RA可能通过活化P38 MAPK信号通路,提高BAX/BCL-2比例,诱导三株不同分化程度(中分化(SGC-7901)、低分化(SNU-1)、未分化(HGC-27))的胃癌细胞发生凋亡。2 RA可能通过活化P38 MAPK信号通路,抑制mTOR通路活化,诱导三株胃癌细胞发生自噬。3 RA诱导的胃癌细胞的自噬,拮抗了RA诱导的细胞凋亡。