WNT信号通路的名称来源于鼠乳腺瘤基因INT-1和果蝇的同源基因WINGLESS，将两个基因组合称为WNT。WNT信号通路在肿瘤发生中有重要意义，它调节细胞生长，迁移和分化，由于它在众多人类肿瘤发生中广泛活化，近年来这条通路在肿瘤研究发面受到很多关注。本实验的目的是建立绿色荧光蛋白(E-GFP)标记的以WNT信号通路为靶点的高通量药物筛选细胞模型，用于筛选治疗与WNT信号通路相关的肿瘤以及某些疾病的新型药物。 WNT信号通路有三条主要的分支，其中的WNT—β-CATENIN—LEF／TCF支路，即被称为经典通路的WNT信号传导途径，调节基因转录，与肿瘤发生关系最为密切。该通路的激活依赖于对细胞内一系列酶和蛋白(例如大肠腺瘤息肉蛋白(APC)、AXIN、酪蛋白激酶(casein kinase，CK)la，le、糖原合成激酶(GSK-3β))所形成的多蛋白复合物的抑制，锂可以通过抑制糖原合成激酶(GSK-3β)，而抑制该蛋白复合物偶联的泛素化降解机制，最终降低细胞内β-CATENIN的降解水平，增加β-CATENIN入核，在与多种转录因子的作用下调节靶基因的转录。本实验用锂作为该信号通路的激活剂，应用于信号通路的细胞模型建立。 根据已发表的文献，选择能够高效与LEF／TCF转录因子结合并刺激WNT靶基因表达的DNA应答元件Topflash序列，加入相应酶切位点修饰后进行人工合成，用分子生物学的方法，构建含有多个串连WNT靶基因应答元件(Topflash)及报告基因E-GFP的重组载体。用大肠杆菌进行质粒扩增和大量提取后，将体外培养的细胞株293E用该重组载体进行稳定转染，用选择性药物进行筛选后，用有限稀释法选取单克隆细胞，在细胞由单克隆分裂至一定程度后，将获得的单克隆细胞株进行单一性、敏感性的筛查，最终挑选出敏感、高效、稳定表达的单克隆细胞，冻存及扩增后，用于筛选针对WNT信号通路的小分子有机药物。 通过一系列实验，利用本论文中所述的方法，最终建立了高效的药物筛选细胞模型，此模型具有筛选方法简便，适用范围广，灵敏度高，结果稳定等优点，并且可用于大规模高通量的药物筛选。通过理论论证，本模型不但适用于小分子化合物及基因工程药物的筛选，也适用于成分复杂的中药的筛选，及其中有效成分的测定。