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本论文从1999年1例、2004~2007年间各一例华南不同地区鸭场疑似鸭肝炎病料中分离并纯化得到5株病毒,经动物回归试验、鸭胚中和试验、AGP实验、电镜观察等进一步证实为1型鸭病毒性肝炎病毒(DHV—Ⅰ),并分别命名为GFS99、GH204、FF205、GFS06和GQY07。将这些华南地区分离毒株和一株弱毒疫苗X株在不同宿主中的适应性比较后,发现所有毒株均适于在鸭胚中生长,经盲传几代后还可以适应鸡胚生长。多数DHV毒株对鸭胚肝细胞(DEL)和鸭胚肾细胞(DEK)的适应性强于鸭胚成纤维细胞(DEF),但毒株均不能适应鸡胚源细胞。
本论文进行了鸭病毒性肝炎的人工发病实验,分析了试验鸭感染病毒后机体的病理组织学变化。结果显示,雏鸭感染DHV后肝、脾等器官出现明显的病理变化,肺、肾、胰等器官也表现不同程度的损伤。
本论文完成了6株DHV—Ⅰ全基因组测序,发现各毒株的基因组长度有所不同(7706 nt~7716nt),但基因结构基本一致,包括628nt~630nt的5’非编码区、6750nt的开放阅读框和314nt的3’非编码区及14nt~20nt的poly(A)尾。
本论文对华南地区分离的4株DHV进行了分子流行病学研究,发现除04G、90D和P04009、AP04203、FS、G毒株外,华南地区分离的4株DHV与16株DHV—Ⅰ的氨基酸相似性均在96.7%以上;VP1基因的变异最大,高变区主要集中在180-194位和213—219位;绝大多数毒株(20株)遗传距离较近,属同一分支;仅04G、90D株和AP04009、AP03337、AP04203、FS、G株与其它毒株的遗传距离较远,占据不同的分支。结合华南地区分离的4个DHV代表毒株的血清中和试验结果,表明当前国内特别是华南地区流行的DHV毒株仍以血清1型为主,尽管部分地区发现新型鸭肝炎。
本论文将1999年在华南地区分离到的一株DHV接种8日龄鸡胚,经鸡胚传80代致弱,其80代的鸡胚尿囊液毒命名为GFS99。对GFS99株进行了全基因组序列分析。结果发现,基因组序列中未出现插入或缺失现象,仅存在大量的点突变:VP0蛋白的10位D→N,23位V→A,217位C→R,249位C→Y;VP3蛋白的102位N→I,210位C→Y;2A2蛋白的64位P→H;2B蛋白的81位L→V;2C蛋白的89位R→H;5UTR基因9位的G→A。至于这些位点氨基酸和核苷酸的改变是否与病毒的毒力有关,还需要进一步深入研究。
本论文对人工经鸡胚80代盲传致弱GFS99株进行了弱毒株的选育研究。实验证明,GFS99是一株具有良好免疫原性的鸡胚化弱毒疫苗候选株。雏鸭1日龄经腿部肌肉注射鸡胚化弱毒GFS99,免后7天时即可产生高峰期的中和抗体,随后抗体水平有所下降,至5周龄时仍可检测到一定水平的中和抗体,而且3周内抗体虽降但保持较高水平。由于鸭肝炎自然暴发时,多发生于3周龄内雏鸭,特别是1~2周龄的雏鸭,结合攻毒保护试验和中和抗体的监测结果,可认为给1日龄雏鸭免疫鸡胚化弱毒GFS99,能有效地保护雏鸭安全度过易感期。