孤儿受体Nur77(也称TR3,NGFI-B,TIS1或NAK-1)是一种立刻早期基因的产物,是孤儿核受体亚家族NR4A的重要成员之一,可被神经生长因子、血小板生长因子、血清及表皮生长因子等诱导表达,在各种生物学过程中发挥至关重要的作用,涉及细胞增殖、代谢、变异和凋亡等过程。Nur77常过度表达于肿瘤细胞中,如胃癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌、卵巢癌等,对抑制肿瘤细胞生长具有极其重要的调控作用,是治疗相关疾病的潜在靶点。壳囊孢菌素B(Cytosporone B, Csn-B)是从小穴壳菌属真菌HTF3中提取的一种天然产物,是天然的Nur77受体激动剂,与Nur77有强大亲和作用并直接将其激活,使其从细胞核转移到线粒体,通过改变Bcl-2的表型使其从肿瘤细胞的保护因子转化为致死因子,触发细胞色素C的释放而杀灭肿瘤细胞。然而,低提取量限制了其进一步应用,一系列Csn-B衍生物相继合成。阿霉酮衍生物Amoitone B是其中之一,经药理活性评价证实其抗肿瘤活性强于母化合物,是一种有潜力的抗肿瘤药物。其化学名为2-壬酰基-3,5-二羟基苯乙酸戊酯,分子式为C22H44O5,分子量为378.50,是一种类白色结晶性粉末,无臭无味,不溶于水,易溶于乙醇、甲醇、丙酮、DMSO等,呈一定的脂溶性。Amoitone B不溶于水的性质使其制剂体外溶出差,严重影响其在体内的吸收分布,降低了生物利用度,易被肝脏代谢,生物半衰期短,疗效不佳,限制了临床应用。本课题以阿霉酮B(AMB)为模型药物,以具有良好生物相容性和生物可降解性的单硬脂酸甘油酯、聚乙二醇硬脂酸酯和中链甘油三酸酯为混合脂质,采用乳化蒸发-低温固化法制备阿霉酮B长循环纳米脂质载体(AMB-PEG-NLC)。实验以包封率为主要考察指标,确定最佳处方工艺,并系统的研究了AMB-PEG-NLC冻干粉的制备工艺,研究了制剂体内外性质。制备工艺为：药脂比为1：16,单硬脂酸甘油酯：聚乙二醇硬脂酸酯：中链甘油三酸酯2.5：2.5：1,表面活性剂用量2.5%,助表面活性剂卵磷脂的用量200 mg,搅拌速度1000 rmp,温度为75℃。AMB-PEG-NLC在电镜下呈类球形,表面光滑不粘连,粒径分布较窄,其粒径为217.2±0.95 nm,Zeta电位为-12.7±0.49 mV,包封率为68.17±0.94%,载药量为4.09±±0.06%。为增加AMB-PEG-NLC的贮存稳定性,将其制成冻干粉,冻干工艺为：AMB-PEG-NLC中加入5%甘露醇,振摇使充分溶解,分装于10 mL西林瓶中,置-80℃的超低温冰箱中冷冻24 h,然后放入冷冻干燥机冻干48h,即得AMB-PEG-NLC的冻干粉。对AMB-PEG-NLC冻干粉进行DSC和X射线衍射分析,结果表明AMB晶型状态发生改变,证明其已被载体包载或吸附。采用透析袋法对AMB-PEG-NLC冻干粉体外释放进行了考察,结果表明AMB-PEG-NLC的体外释药具有缓释特征。以AMB-PEG-NLC的外观、再分散性、含量和包封率为指标,初步考察了AMB-PEG-NLC冻干粉的稳定性,结果表明AMB-PEG-NLC冻干粉在25℃和4℃条件下放置三个月,可保持较好物理化学稳定性。本文采用HPLC法,测定了AmB-PEG-NLC经家兔耳缘静脉注射后在体内的药物动力学情况。静脉注射AmB-PEG-NLC后,AUC=12.549 h mg L-1 MRT=8.879h, t1/2=3.731 h, CL=0.638L·h-1·kg-1,与阿霉酮B溶液(AmB-Sol)和阿霉酮B纳米脂质载体(AmB-NLC)相比,AUC与MRT明显增大,清除率降低。本文采用MTT法考察AmB-PEG-NLC对人结肠癌SW620细胞和肝癌HepG2细胞的抑制作用。结果可以看出,在相同给药剂量和培养时间条件下,AmB-PEG-NLC对癌细胞的抑制作用明显强于AmB-Sol和AmB-NLC。原因可能是纳米粒可以内吞的方式被细胞摄取,而纳米脂质载体所含脂质材料具有极好的生物相容性增加了纳米粒与细胞的粘附性,增长了药物与细胞的作用时间。因此,AmB-PEG-NLC和AmB-NLC可增加细胞对药物的摄入量从而表现出更强的抑制作用。此外,由于PEG可溶于极性和非极性溶剂中并可以溶于细胞膜,PEG修饰的纳米粒更容易进入细胞,因此AmB-PEG-NLC会使更多的AmB进入癌细胞,具有更强的细胞抑制作用。PI染色与DAPI染色后对细胞形态变化的研究进一步证实了长循环纳米脂质载体能促进肿瘤细胞的凋亡。为进一步研究AmB-PEG-NLC细胞凋亡机制,用流式细胞仪进行了凋亡检测。结果表明,长循环纳米脂质载体可显著增强AmB的癌细胞凋亡作用。以阿霉酮B为模型药物制备长循环纳米脂质载体的研究目前国内外尚未见报道,本文的研究成果为难溶性药物注射剂的开发提供了思路,并对抗癌药阿霉酮B的临床开发应用有着重要的意义。