Prmt5是一种Ⅱ型精氨酸甲基转移酶,参与细胞周期调控、RNA加工、生殖细胞发育、肿瘤形成等众多生物学进程。Mep50是Prmt5的伙伴蛋白,Prmt5-Mep50蛋白复合体的结构在人类、非洲爪蟾中已有相关报道。Mep50被认为可加强Prmt5与底物的结合并增强Prmt5的活性。本文主要对青鳉Prmt5和Mep50的相互作用进行了研究。首先,本研究进行了青鳉mep50和prmt5的原位杂交实验。研究发现,在青鳉胚胎发育过程中,二者在时间和空间上广泛表达,在脑、胸鳍、体节等部位mep50和prmt5表达的信号都比较强烈,提示二者可能共表达。我们又进行了免疫共沉淀和酵母双杂交实验。免疫共沉淀实验结果证实Mep50和Prmt5确实存在相互作用。但当Mep50的截短突变体与Prmt5进行免疫共沉淀时,未能检测到二者有结合。这一情况可能是由于Mep50截短过程中截去了与Prmt5结合的位点,从而不能结合,也可能是因为随着Mep50被截短,其空间结构发生了改变,使原本暴露的结合位点被包埋从而无法与Prmt5结合。然而,具体的原因还需要后续实验进一步证实。酵母双杂交结果再次验证了 Mep50和Prmt5的相互作用。根据蛋白的结构域分析,我们构建了 Mep50和Prmt5的截短和缺失突变体,当Prmt5截短突变体与Mep50进行酵母双杂交时,随着Prmt5序列长度变短,与Mep50的结合力越来越弱。当截短片段的长度由270 aa变为203 aa时,结合力明显变弱,说明在这区间可能含有Mep50和Prmt5结合的功能位点。Mep50的缺失突变体与Prmt5的酵母双杂交实验则说明Mep50 WD40③结构域在Mep50和Prmt5的相互作用中起着关键的作用。最后,为了获得纯化的蛋白,进而制备Mep50和Prmt5抗体,并对Mep50-Prmt5蛋白复合体晶体结构进行解析,我们将Mep50和Prmt5构建到了 pET系列载体上,在大肠杆菌BL21菌株中诱导蛋白表达。SDS-PAGE胶检测结果显示,二者均能大量表达。通过镍柱亲和层析已获得了纯化的Mep50蛋白,然而Prmt5的纯化效果并不理想,推测是由于蛋白折叠导致His或GST标签无法暴露从而无法结合层析柱。此外,还构建了 Mep50和Prmt5的截短突变原核表达载体,经诱导可以大量表达,接下来需要进一步对其进行纯化。以上实验结果为Mep50-Prmt5蛋白复合体在鱼类众多生理过程中的功能及调控机制的研究打下了基础。