第一部分TAZ在正常宫颈组织细胞与鳞状细胞癌组织细胞中的表达及亚细胞定位意义目的:比较TAZ在正常宫颈组织和宫颈鳞状细胞癌组织细胞中的表达及亚细胞定位差异,分析TAZ蛋白表达水平与宫颈鳞状细胞癌的临床及病理特征间的联系。方法:(1)选择2014年1月-2016年12月在西南医科大学附属医院妇科行手术治疗的宫颈鳞状细胞癌患者作为研究对象,均为汉族,术后病理检查再次证实为宫颈鳞状细胞癌;所有患者术前均未行放疗、化疗及其它抗肿瘤治疗,临床及病理资料完整,共218例。同期因子宫肌瘤行子宫全切术的正常宫颈标本(通过常规方法筛查宫颈癌,包括巴氏涂片、高危HPV检测和病检均无异常)作为对照,共30例。用免疫组织化学和免疫荧光法测定对照组及宫颈鳞状细胞癌组织细胞中TAZ蛋白的表达水平及亚细胞定位,并分析宫颈鳞状细胞癌临床病理特征包括患者年龄、临床分期、淋巴结转移情况、细胞分化程度等与TAZ蛋白表达水平及亚细胞定位间的关系。(2)收集新鲜正常宫颈组织、新鲜宫颈鳞状细胞癌组织,采用试剂盒分离细胞核、细胞质蛋白后,Western blot分别检测TAZ蛋白在两种组织细胞的细胞核、细胞质中的表达水平差异。结果:(1)212例宫颈鳞状细胞癌标本(218例标本中有6例发生脱片或染色失败)中TAZ的表达水平结果显示,85.85%(182/212)的鳞状细胞癌标本TAZ染色阳性,阳性表达主要在细胞质;仅35.85%(76/212)观察到TAZ核表达。不同年龄、不同FIGO分期TAZ表达的免疫组化染色评分(immunoreactive score;IRS)没有统计学差异(P>0.05),不同分化程度即低分化、中分化、高分化组织细胞中IRS>4分的比例分别为10.61%、31.08%和47.22%;有、无淋巴结转移者组织细胞中TAZ蛋白表达IRS>4分的比例分别为13.11%、37.09%,差异均具有统计学意义(P<0.05)。30例正常宫颈组织的细胞质、细胞核中均有TAZ的表达,在正常宫颈组织基底层细胞中,TAZ的核表达尤为明显。(2)Western blot结果显示,TAZ在正常宫颈组织细胞的细胞质和细胞核中的表达水平均高于宫颈鳞状细胞癌组织细胞的细胞质及细胞核,尤其细胞核中的表达水平两者差异显著;宫颈鳞状细胞癌组织细胞的细胞质中TAZ表达水平显著高于细胞核,差异有显著性(P<0.05)。结论:TAZ的表达水平与肿瘤分化程度及有无淋巴结转移有相关性。正常宫颈组织细胞的细胞质、细胞核中均有TAZ蛋白的明显表达;而宫颈鳞状细胞癌组织细胞中TAZ蛋白的表达水平较低,细胞核中呈低表达甚至表达缺失。说明TAZ表达水平及亚细胞定位与宫颈鳞状细胞癌发生、发展及预后可能有关。第二部分TAZ的亚细胞定位与整合素β1-Src信号通路间的联系分析目的:明确正常宫颈组织细胞和宫颈鳞状细胞癌细胞中TAZ蛋白的表达水平及亚细胞定位与整合素β1-Src信号通路间的联系。方法:(1)选择因子宫肌瘤行子宫全切术的正常宫颈标本30例,行手术治疗的宫颈鳞状细胞癌标本30例,免疫荧光法分别检测两种组织细胞中整合素β1蛋白的表达以及与Src蛋白、TAZ蛋白的共表达情况。Western blot检测新鲜正常宫颈组织、宫颈鳞状细胞癌组织中整合素β1蛋白、Src蛋白的表达差异。(2)体外培养人宫颈永生化鳞状细胞(Ect1/E6E7)和人子宫颈表皮癌细胞(ME180),予以Src家族激酶抑制剂Su6656处理ME180细胞,以DMSO作为对照,Western blot检测细胞质和细胞核提取物中TAZ蛋白的表达水平差异;用control siRNA或TAZ siRNA转染Ect1/E6E7和ME 180细胞,Western blot检测不同处理方式对整合素β1和Src蛋白表达的影响。结果:(1)宫颈鳞状细胞癌组织细胞中整合素β1蛋白、Src蛋白的表达水平高于正常宫颈组织。三色荧光显示,与正常宫颈组织相比宫颈鳞状细胞癌组织细胞中TAZ蛋白表达明显较低,其整合素β1、Src、和TAZ的共表达明显减少或缺失。(2)ME180细胞经过Src家族激酶抑制剂Su6656处理后,细胞质TAZ蛋白表达水平降低,而细胞核组分中TAZ表达水平升高;相反,在DMSO对照组,TAZ在细胞质呈高表达,细胞核中呈低表达。使用control siRNA或TAZ siRNA转染Ect1/E6E7和ME 180细胞后发现,与control siRNA相比,转染TAZ siRNA组的Ect1/E6E7和ME 180细胞中整合素β1和Src的表达均增加。结论:宫颈鳞状细胞癌中TAZ、整合素β1和Src之间存在密切的联系,TAZ在宫颈鳞状细胞癌细胞中的表达及亚细胞定位可能与整合素β1-Src信号通路的激活有关。