大肠杆菌病是威胁人类和动物健康的重要疾病之一。对于畜禽养殖业来说,动物种群中大肠杆菌病的流行和暴发往往带来巨大的经济损失,例如断乳仔猪水肿病、仔猪黄、白痢等,在养猪业中发病率和死亡率都较高。其中仔猪水肿病尤为严重,死亡率最高可达90%。现今,已有多种致病性大肠杆菌病原体可引起人畜共患病,加之菌株耐药现象的增多都给疾病的预防和治疗带来新的困难,多重耐药大肠杆菌在临床上更是多见,因此对致病性大肠杆菌毒力因子和耐药性的研究已成为现阶段科研研究的热点和难点。本实验的目的是研究接合性质粒在致病性大肠杆菌传播耐药基因和毒力基因中的作用,以及由基因水平传播所引起菌株在毒力和耐药性方面的变化,52株实验用大肠杆菌分离于哈尔滨周边地区大肠杆菌病发病猪场,采用小白鼠体内攻毒试验确定菌株的致病性。本实验通过质粒接合试验分析致病大肠杆菌的耐药性、细菌毒力水平传播的可能性,并比较分析亲本菌株和接合子菌株的耐药性、毒力和毒力基因的变化。通过比较亲本菌株与接合子菌株对hep-2细胞的侵袭力评价菌株接合前后毒力的变化。依据CLSI (Clinical and Laboratory Standars institute)推荐的K-B(Kibry-bauer)法检测接合子菌株与其亲本菌株对12种抗菌药物的敏感性以及采用PCR技术检测大肠杆菌所携带的毒力基因。最后应用透射电镜技术观察亲本菌株和接合子菌株对hep-2细胞造成损害程度。本实验成功获得接合子菌30株,接合实验的成功率为57.7%。药敏试验结果表明,分离的受试菌株均表现出不同程度的多重耐药,与其亲本菌株相比,接合子菌株也表现出多重耐药,具有较强的获得外源耐药基因的能力。与亲本菌株相比,其接合子菌株对hep-2细胞毒力也发生了较大的改变,其中毒力表现出增强的接合子菌株占43.3%(13/30)。综合毒力基因PCR检测结果分析,我们发现毒力岛基因在致病性大肠杆菌的毒力表达中发挥重要作用,与其亲本菌株相比,毒力岛基因阴性的接合子菌株对hep-2细胞的毒力也降低。本次实验分析了毒力基因和耐药基因通过质粒接合水平传播后菌株毒力和耐药性表达的变化。由于毒力基因和耐药基因在水平传播过程中可发生菌株的耐药性和毒力的变化,因此加强对猪源致病性大肠杆菌接合性质粒携带毒力基因水平传播的研究和监控是控制大肠杆菌毒力和耐药性增强的有效手段之一。