目的：克隆survivin基因、原核表达并鉴定；探讨survivin基因反义核酸(AS-ODN)对人喉癌细胞系的生长抑制作用。 方法：(1)从培养的人喉癌Hep-2细胞中提取总RNA，经RT-PCR获得survivin基因；将该基因克隆到pGEM-T-Easy载体中，进行测序鉴定；将测序正确的survivin基因亚克隆到pRSET表达载体中，构建survivin表达载体pRSET-survivin，经限制性酶切鉴定、筛选，将获得的正确的表达载体质粒转入大肠杆菌，以IPTG诱导表达4～5h，收集菌体做SDS-PAGE分析，鉴定survivin蛋白的表达。(2)以高表达survivin基因的人喉癌细胞系Hep-2为靶细胞、反义survivin(AS-ODN)为阻断剂，通过MTT试验观察AS-ODN对喉癌细胞的生长抑制作用，RT-PCR分析survivin基因反义核酸(AS-ODN)对survivin基因表达的影响。 结果：(1)DNA测序结果证明，获得了survivin基因，其序列与GenBank中报道序列完全一致；SDS-PAGE分析表明，survivin蛋白获得 第四军医大学硕士学位论文高效表达，其分子量为16.SKD，表达量约占菌体总蛋白的30%;(2) MTT试验及RT-PCR分析表明，H即一2在AS一ODN作用下，细胞数量明显减少，反义survivin(AS一ODN)明显抑制了.喉癌细胞Hep一2的生长及其survivin基因的表达(P<0.05)。 结论:(1) Survivin基因的克隆和表达均获得了成功，为Survivin蛋白单克隆抗体的制备以及进一步探讨survivin基因在喉癌及其它恶性肿瘤诊断和治疗中的应用奠定了基础;(2)Survivin基因的反义核酸(AS一ODN)对人喉癌细胞的生长可能起十分重要的抑制作用，它有望成为喉癌基因治疗的新靶点。