新疆红肉苹果PGIP基因的克隆及原核表达

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多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(Polygalacturonase inhibiting proteins,PGIPs)是一种胞外的细胞壁结合糖蛋白,在植物的防卫反应中具有重要的作用。它能够特异性结合病原真菌分泌的内切多聚半乳糖醛酸酶并抑制其水解活性,限制植物致病真菌的生长,同时引发植物的防卫反应。它还与大多数植物抗性基因一样,属于富亮氨酸重复(Leucine-rich repeat,LRR)蛋白超家族。PGIP基因在植物抗病育种中已成为一重要的候选基因,其分离鉴定是进行转基因研究的基础。本研究以新疆红肉苹果[Malus sieversii f.neidzwetzkyana(Dieck)Langenf]为材料,克隆其PGIP基因并进行原核表达,旨在为进一步的苹果抗病分子机理研究提供基本资料,并为新疆野苹果资源的有效保护与持续利用提供科学依据。序列分析表明,新疆红肉苹果PGIP基因cDNA编码区全长993bp,编码330个氨基酸残基,命名为MsPgip,GenBank登录号为JQ001783。MsPgip分子量为36.6kD,等电点为7.05,有6个潜在的N-糖基化位点,信号肽为N端24个氨基酸残基。该蛋白质还具有2个连续的24个氨基酸残基大小的LRR基序(LSQLKNLTFLDLSFNNLTGAIPSSLPNLNALHLDRNKLTGHIPIS)。与已克隆的‘澳洲青苹’、‘金冠’、‘富士’苹果PGIP氨基酸序列同源性均高达99%。将MsPgip基因片段连接到原核表达载体pET-30a(+)中,构建融合表达重组质粒,转化到E.coli BL21(DE3)中进行表达。原核表达产物经SDS-PAGE分析表明,表达蛋白分子量与预期一致。
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