论文部分内容阅读
骨肉瘤(osteosarcoma, OS)是指肿瘤细胞能直接形成肿瘤性类骨组织或骨组织的恶性肿瘤。骨肉瘤是原发性骨恶性肿瘤中最常见者,约占骨恶性肿瘤的1/3。骨肉瘤的发病率在男性略高,可发生于各级年龄,但最多见于11～25岁,年龄越大,发病率越低。骨肉瘤多发生在骨骼生长发育的旺盛时期,其恶性程度又较高,因此是严重影响劳动生产力并危及生命的重要肿瘤之一。肌糖蛋白C(TN-C)是细胞外基质重要组成成分,在肿瘤发生发展中起重要作用,但其在骨肉瘤发病过程中的表达调变和作用尚不明确。因此,本课题拟探讨TN-C在骨肉瘤中的表达、意义及其相关的分子调变机理。目的:判断TN-C在骨肉瘤中的分布和意义。制备其特异性抗体。判断TN-C在骨肉瘤中的分布规律,分析骨肉瘤相关生长因子EGF和IGF-1和机械张力对TN-C协同调变机理,为探索潜在的有效临床治疗提供思路。方法:RT-PCR法克隆TN-C cDNA,将其插入GST载体,IPTG诱导表达并纯化,常规免疫小鼠,制备单克隆抗体并利用western blot和免疫组织化学技术对进行鉴定。利用抗体构建检测TN-C的夹心ELISA方法,检测骨肉瘤患者中血清中和肿瘤组织标本中的的TN-C表达情况。探讨EGF和IGF-1和机械张力对TN-C协同促转录,表达及其相关信号转导途径。结果:成功克隆TN-C cDNA并表达融合蛋白。获得3株TN-C特异性单克隆抗体,其中都能用于免疫组织化学鉴定及Western blot。其中2株可以用以构建夹心ELISA方法检测TN-C,骨肉瘤患者血清中TN-C浓度明显高于正常对照。TN-C在骨肉瘤组织中阳性分布,主要集中于间质中。用不同的蛋白激酶抑制剂,我们发现EGF和IGF-1和机械张力通过RHoA/ROCK途径诱导TN-C的转录。同时,EGF和IGF-1也通过ERK途径诱发TN-C的表达。结论:1.成功制备TN-C特异性单抗并构建检测其分布的夹心ELISA方法;2.TN-C在骨肉瘤患者血清和组织中都呈阳性分布;3.骨肉瘤相关生长因子EGF、IGF-1和机械张力对通过共同和不同的信号传导通路,在TN-C的转录和表达中有协同作用。