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目的:上皮性卵巢癌是致死率最高的妇科恶性肿瘤,大多数病人诊断时即为晚期。手术+紫杉醇/铂类联合化疗是卵巢癌的标准治疗方法。大多数患者最初对治疗起反应,几乎都会出现复发耐药,晚期卵巢癌病人的5年生存率约30%。一些实验证据支持卵巢癌中具有干细胞特征的细胞亚群存在。肿瘤干细胞被认为是肿瘤进展、耐药和复发转移的根源。miRNA是非编码的小RNA分子,通过蛋白翻译抑制或m RNA降解负向调控基因表达。据报道miRNA对肿瘤干细胞的自我更新和分化起调控作用。本研究拟探索miR-31、miR-222在上皮性卵巢癌耐药中的作用和分子机制,以期为卵巢癌预后判断、治疗分子靶标的研究提供线索。方法:1卵巢癌细胞在干性培养基(无血清DMEM/F12/甲基纤维素,加入EGF、FGFb和B27)培养14天能聚集成球,通过连续球体形成实验建立SKOV3/self、ES-2/self细胞系;2用CCK-8的方法验证SKOV3/self细胞和COC1/DDP细胞对顺铂的耐药性;3应用荧光定量PCR技术筛选SKOV3和SKOV3/self细胞对、COC1和COC1/DDP细胞对中差异表达的miRNAs;4慢病毒感染SKOV3细胞,构建稳定过表达miR-31、miR-222的卵巢癌细胞系;5用CCK-8的方法检测SKOV3-miR31、SKOV3-miR222细胞对顺铂的IC50;6 CCK-8和平板克隆形成实验检测细胞的增殖能力;7球体形成实验检测细胞的球体形成能力;8划痕及transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力;9在miRWalk网站预测miR-31、miR-222的靶基因;10用TCGA和GEO数据库分析卵巢癌样本中miRNA和靶基因的关系以及与卵巢癌临床病理特征和预后的关系。总生存期(overall survival,OS)和无病生存期(disease free survival,DFS)的比较用Kaplan-Meier生存曲线log-rank检验;多因素COX比例风险回归模型用来确定影响预后的独立因素;11 GSEA是设计用来检测预先定义的功能相关的基因集表达上的一致性差异。用TCGA RNA-seq数据通过GSEA分析靶基因相关的基因中富集的通路。结果:1 SKOV3/self细胞对顺铂的IC50(23.63μM)是SKOV3细胞(IC50=1.596μM)的14.8倍,COC1/DDP细胞对顺铂的IC50(7.482μM)是COC1细胞(IC50=2.566μM)的2.9倍。SKOV3/self细胞和COC1/DDP细胞对顺铂更耐药。2 miR-31、miR-222在SKOV3/self细胞中分别上调2.7倍和3倍;miR-31、miR-222在ES-2/self细胞中分别上调2.353倍和1.846倍。3 SKOV3-miR31细胞和SKOV3-miR222细胞对顺铂的IC50、生长速度、迁移和侵袭能力没有变化。4在0.1μM顺铂作用下,与对照SKOV3-TR细胞克隆形成率(5.15%)相比,SKOV3-miR31细胞(9.3%)和SKOV3-miR222细胞(8.6%)的克隆形成率明显升高(P<0.05)。间接反映了SKOV3-miR31和SKOV3-miR222细胞对顺铂的抵抗性。5 SKOV3-miR31细胞的2次成球率(54%)和SKOV3-miR222细胞的2次成球率(45%)高于SKOV3-TR细胞(16.8%)的2次成球率(P<0.05)。表明miR-31和miR-222过表达增强卵巢癌细胞的干性。6 miR-222与卵巢癌预后负相关,有淋巴管浸润的患者miR-222表达量较高,提示miR-222可能与卵巢癌转移有关。7 miR-31表达水平与肿瘤分级正相关,提示miR-31可能与卵巢癌的分化程度相关。8 PBX2、CCNC、JARID2和SALL2与miR-31负相关,DNMT3B和ALDH1A1与miR-222负相关。9 miR-31、miR-222的靶基因与卵巢癌肿瘤分期、分级和血管、淋巴管浸润相关,与预后正相关。10靶基因调节Wnt/β-catenin通路和Notch通路。说明与卵巢癌干细胞的干性相关。结论:miR-31、miR-222在SKOV3/self和ES-2/self细胞中表达上调;miR-222与预后负相关,且与淋巴管浸润有关,miR-31表达水平与肿瘤分级正相关。miR-31、miR-222可能通过对靶基因的抑制作用,进而保持卵巢癌细胞的“干性”,促进耐药。