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木质素的含量及组成对植物抗病性有较大影响,植物Rop蛋白也可调控植物抗病性。本实验室具有B3.1、J40.81、Dt、B10、AS23、dAS烟草株系,分别为CCR、CAD、CCR与CAD、COMT、CCoAOMT、COMT与CCoAoMT木质素合成基因抑制株系,D、K分别为拟南芥(Arabidopsis thaliana)35S-F5H、C4H-F5H基因过表达株系,同时本实验室从小麦中克隆出四个基因,即3个Rop类似基因,1个F5H类似基因,分别命名为Rop6、Rop11、Rop12以及F5H-5。为了分析分离出的基因与木质素相关功能,分别构建了Rop6、Rop11、Rop12以及F5H-5基因的正反义pKYLX71植物表达载体,且成功获得了烟草转基因植株。 小麦RT-PCR显示Rop基因及F5H-5存在组织特异性表达,对小麦接种叶锈菌,三个Rop基因表达量均出现不同程度的上调。观察分析转基因烟草T1代表型,结果显示Anti Rop12株系烟草平均开花时间有所增加,同时B3.1、Dt株系叶片出现萎缩现象。T0代转基因种子抗盐、抗旱结果显示Rop蛋白及转F5H-5基因株系在渗透胁迫处理下对烟草根的生长具有一定的促进作用,木质素关键酶基因抑制株系与对照相比无明显变化。 转基因烟草株系叶片接种病原菌后,Rop6、F5H-5、D株系的烟草抗病能力得到提高,而Anti Rop6、Rop12、B3.1、J40.81、Dt、AS23、dAS木质素合成酶抑制株系抗病性降低。Wiesner染色显示Rop6株系与对照相比木质素含量增加,Anti Rop6、Rop12、B3.1、J40.81、Dt、dAS等株系木质素含量降低;当各株系受到病原菌侵染后,大部分株系木质素含量均增加。对各株系进行maule染色,结果显示F5H-5株系S型木质素含量增加,Rop12、J40.81、AS23以及dAS株系与对照pKYLX71相比S型木质素略有降低;当各株系受到病原菌侵染后各株系木质素组成无明显变化。RT-PCR分析显示,Rop6株系CCR基因及CAD基因的表达量上调;Rop12株系CCoA OMT-1基因的表达量降低;从总体上看当各株系受到病害胁迫时,木质素合成关键酶基因CCR、CAD、COMT、CCoAoMT以及F5H表达量都具有上调的趋势。DAB染色显示,Rop6、Rop12株系在受到病原菌侵染时可诱导过氧化氢的积累及扩散。 本研究初步分析了木质素含量和组成与抗病性关系以及小麦中Rop基因、F5H对木质素抗病性的调控。木质素含量增加以及S型木质素的增加均可使植株抗病性增加,反之则降低;不同的Rop蛋白作用不同,Rop6可能通过调节木质素合成酶CCR、CAD增加木质素的含量及植物抗病性,其他Rop蛋白对植物抗病性也产生不同程度的影响;在植株受到病害胁迫时,木质素含量及相关合成内源基因也发生不同程度的变化。