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背景类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis, RA)是一种慢性、炎症性的自身免疫疾病,它的基本病理特征是关节滑膜炎症。患者病情迁延难愈,常常会累及全身多关节,最终导致关节功能丧失和残疾,严重危及患者的生活质量甚至生命。中药熏洗法凭借药力、热力双重作用,内病外治,直达病所,在减轻关节疼痛、肿胀、缓解病情方面有独特的优势,在临床应用广泛。但是,对中药熏洗法的具体实施形式(如熏洗时间、熏洗的温度、熏洗药液浓度的控制等等)大多凭借经验,不尽二致,缺乏标准,导致中药熏洗形式多样,操作方式也千差万别,不利于交流和传承,这些诸多问题困扰着医务工作者。目的通过比较不同的熏洗时间、不同温度、不同浓度药液熏洗对疗效的影响,探讨熏洗法治疗RA的最佳方案,以期探求以发挥最佳疗效为目标的中药熏洗操作方法,为中药熏洗的临床操作提供依据,推动中医护理规范化发展,促进中医护理操作不断完善。方法(1)选择SD雄性大鼠66只,随机抽取6只为空白对照组,其余建立胶原诱导性关节炎(Collagen-Induced Arthritis, CIA)大鼠模型。随机分组,为模型组(n=6)、熏洗组1-9组(n=6*9)。模型组造模后不予治疗,熏洗组1~9组选择正交实验设计表L9(34)分配三因素、三水平实验方案,即:时间(20min、30min、40min)、温度(38℃、41℃、44℃)、浓度(低、中、高)。(2)基线比较:比较各组大鼠体重、足趾容积。(3)比较各组大鼠熏洗前、熏洗2周、熏洗4周一般情况。(4)比较各组大鼠熏洗前、熏洗2周、熏洗4周体重变化。(5)比较各组大鼠熏洗前、熏洗2周、熏洗4周足趾容积变化。(6)观察各组大鼠熏洗前、熏洗2周、熏洗4周足趾肿胀、变形程度,进行大鼠关节炎指数(Arthritis Index, AI)评分,空白对照组无此得分。(7)熏洗4周后,经心脏采血、离心、进行酶联免疫吸附剂测定(Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA),对各组大鼠的血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1p(IL-1β)的水平进行比较。(8)熏洗4周后,收集各组大鼠一侧踝关节病理组织标本进行病理组织形态学观察。(9)采用正交实验设计资料的方差分析,计算最佳熏洗方案。结果(1)基线比较:各组大鼠造模前体重、足趾容积差异无统计学意义(P>0.05)。(2)一般情况:造模前,各组大鼠一般情况良好;造模后,模型组、熏洗组1-9组大鼠均出现关节红肿,部分大鼠出现注射局部皮肤溃疡;熏洗2周、4周,模型组大鼠症状持续加重,关节肿胀明显,不能负重,活动受限;熏洗组大鼠活动尚可,关节肿胀有所改善,但关节红肿仍明显;空白对照组表现正常。(3)体重比较:熏洗前,各组大鼠体重比较,差异无统计学意义,P>0.05,具有可比性。熏洗2周、4周,熏洗组1~9组、模型组分别与空白对照组体重比较,空白对照组组大鼠体重持续增加明显,熏洗组各组、模型组体重明显低于空白对照组,P<0.05,差异有统计学意义。熏洗组1~9组分别与模型组大鼠体重相比较,模型组大鼠体重低于熏洗组,P<0.05,差异有统计学意义。熏洗组1~9组大鼠按照正交实验设计分配不同熏洗方案,各组差异无统计学意义,P>0.05。(4)足趾容积比较:熏洗前,熏洗组1~9组、模型组分别与空白对照组的比较,足趾容积显著增加,P<0.05,差异有统计学意义;熏洗组1~9组与模型组足趾容积相比,P>0.05,差异无统计学意义,具有可比性。熏洗2周、4周,熏洗组1~9组、模型组分别与空白对照组比较,大鼠足趾容积明显大于空白对照组,P<0.05,差异有统计学意义;熏洗组与模型组大鼠足趾容积相比较,熏洗组各组足趾容积有所下降,而模型组足趾容积持续增加,二者比较P<0.05,差异有统计学意义。熏洗组1-9组大鼠按照正交实验设计方差分析,最佳熏洗方案为熏洗30min、温度44℃、高浓度药液。(5)关节炎症评分比较:熏洗前,模型组与熏洗组AI评分得分均大于4分,,造模成功,二者比较,P>0.05,差异无统计学意义,二者具有可比性。熏洗2周、4周,熏洗组与模型组比较,熏洗组得分小于模型组,P<0.05,差异有统计学意义。熏洗组1~9组大鼠按照正交实验设计方差分析,最佳熏洗方案为熏洗30min、温度44℃、高浓度药液。(6)IL-1β水平:熏洗4周后,熏洗组1~9组与模型组比较,IL-1β水平明显下降,P<0.05,差异有统计学意义。熏洗组1~9组大鼠按照正交实验设计方差分析,最佳熏洗方案为熏洗30min、温度38℃、低浓度药液。(7)TNF-α水平:熏洗4周后,熏洗组1~9组与模型组比较,TNF-α水平明显下降,P<0.05,差异有统计学意义。熏洗组1~9组大鼠按照正交实验设计方差分析,最佳熏洗方案为熏洗30min、温度41℃、中浓度药液。(8)病理HE染色:空白对照组大鼠病理HE染色正常。模型组可见关节腔变窄,关节腔内可见炎细胞;炎细胞严重浸润;血管翳形成;滑膜细胞排列杂乱,滑膜肿胀、增生明显,可见严重变性坏死。熏洗组可见中度炎细胞浸润:滑膜变薄、滑膜细胞稍有增生,中度肿胀;与模型组相比,血管翳较少,表明具有明显好转。(9)经过加权计算大鼠足趾容积、AI评分、IL-1β水平、TNF-α水平综合得分,结合熏洗组1-9组正交实验设计方案,得出最佳熏洗方案为熏洗时间30min、温度41℃、高浓度药液。结论(1)经过4周熏洗,熏洗组1~9组与模型组比较,一般情况改善,足趾红肿相对较轻,病理染色显示滑膜变薄、炎细胞轻度浸润。血清IL-1β水平、TNF-a水平均低于模型组。证明中药熏洗法在改善关节功能、调节免疫方面具有一定作用,但大鼠足趾肿胀短期内仍难以改善。(2)熏洗法治疗CIA大鼠,在熏洗30min、温度41℃、高浓度药液条件下治疗效果最佳。此外,熏洗时间30min、温度44℃、高浓度药液对改善关节肿胀效果更佳。(3)熏洗法治疗RA存在最佳熏洗时间、熏洗温度和熏洗浓度。本实验研究结果为临床规范化熏洗治疗RA提供重要的参考价值和借鉴意义。