纤维素降解微生物的筛选及高效纤维素酶活条件研究

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纤维素是自然界中最丰富的可再生资源。纤维素酶是降解纤维素成为可被利用的葡萄糖的关键。筛选出高效的纤维素降解菌株和催生出更高的纤维素酶活性是当今研究的主要课题。本文优化了纤维素酶活的实验方法,确定了纤维素羧甲基纤维素钠(CMC-Na)酶活和滤纸(FPA)酶活的具体实验条件与方法。从生境中筛选出高效纤维素降解菌株并通过溶解氧、培养温度、底物浓度和接菌量等因素确定最适条件和最大酶活。通过研究可得出以下结论:(1)空白背景处理是影响纤维素酶活的重要因子,空白处理以菌液先离心后121℃高温高压彻底灭菌为标准处理。CMC-Na酶活的水解温度与水解时间分别为50℃和30min,DNS用量和沸水浴时间分别为1.5mL和5min;FPA酶活的水解温度与水解时间分别为40℃和60min,DNS用量和沸水浴时间分别为3.0mL和10min。(2)生境中筛选出的细菌降解纤维素菌株较多,主要是芽孢杆菌属或是类芽孢杆菌属,但整体活性不高,FPA酶活相较于CMC-Na酶活较低。真菌菌株以毛孢子菌属、链格孢属和木霉为主,CMC-Na酶活相对于FPA酶活较低。(3)通过对菌株溶解氧、培养温度、底物浓度和接菌量进行单因素实验,确定各因子对菌株酶活的影响。溶解氧对纤维素酶活有影响,溶解氧过高过低都会影响纤维素酶活。培养温度细菌菌株和真菌菌株有所不同。细菌的最适培养温度为37℃,真菌最适培养温度为25℃。在一定范围内,纤维素降解菌株的CMC-Na酶活和FPA酶活随着底物浓度和接菌量的增加呈现出增加的趋势。确定了纤维素细菌菌株最适培养条件是摇床转速150r/min,培养温度37℃,底物浓度为2C,接菌量为5mL,在此条件下纤维素降解细菌菌株分泌纤维素酶最多,酶活最大。真菌菌株最适条件为摇床转速150r/min,培养温度25℃,底物浓度为2C,接菌量为5mL,在此条件下纤维素降解真菌菌株分泌纤维素酶最多,酶活最大。
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