论文部分内容阅读
目的分离鉴定来自成都大熊猫粪便及湖南泡菜样品中的魏斯氏菌(Weissella),并对其益生性质进行分析。材料与方法(1)使用菌落观察法、生理生化鉴定法及16S rRNA鉴定法对来自大熊猫粪便及泡菜样品的魏斯氏菌进行分离鉴定。对分离鉴定出来的魏斯氏菌进行耐酸和耐胆盐实验,并测定其β-葡糖苷酶活性,探讨魏斯氏菌的益生性质。(2)通过PCR扩增魏斯氏菌基因组中的β-葡糖苷酶基因,连接电转化到大肠杆菌(Escherichia coli DH5α)后提取质粒送成都擎科梓熙生物技术有限公司测序。将β-葡糖苷酶基因的PCR扩增片段和克隆载体pET22b双酶切后进行连接,电转化到大肠杆菌(E.coli BL21)。IPTG诱导重组酶的表达并测定其酶活,对包涵体表达的重组酶进行纯化复性。(3)对分离鉴定的魏斯氏菌提取质粒,胶回收分离纯化质粒条带,将纯化后的质粒进行测序,并对测序结果进行序列分析。结果(1)从大熊猫粪便样品中分离出1株食窦魏斯氏菌(W.cibaria),从泡菜样品中分离出4株融合魏斯氏菌(W.confusa)。5株魏斯氏菌均能发酵纤维二糖,均能在pH 3.0的条件下生长;融合魏斯氏菌QJ013及HH053对胆盐耐受性较好,在0.2%胆盐条件下能够生长。(2)从食窦魏斯氏菌M2中克隆得到β-葡糖苷酶基因并在大肠杆菌中得到表达。该基因与已知菌株W.cibaria strain 37的β-葡糖苷酶基因的同源性为93%。(3)从融合魏斯氏菌QJ012中分离得到一个质粒pQJ012,其核苷酸序列同食窦魏斯氏菌中的pJY33和pKLCA的相似性分别为93%、92%。ORF1编码复制蛋白(Rep),该复制蛋白氨基酸序列与质粒pJY33和pKLCA的相似性分别为91%、85%。结论本实验共分离得到5株魏斯氏菌,首次从大熊猫肠道中分离得到食窦魏斯氏菌。5株魏斯氏菌均具有一定的耐酸性(pH 3.0),QJ013和HH053能耐受0.2%胆盐,符合益生菌的一般益生性质。分离得到的5株魏斯氏菌均能降解纤维二糖,我们从来自大熊猫肠道的食窦魏斯氏菌M2中克隆得到β-葡糖苷酶基因并在大肠杆菌中得到表达,说明食窦魏斯氏菌可能参与了宿主体内纤维素的消化过程。从融合魏斯氏菌QJ012中分离得到一个质粒pQJ012,我们推定pQJ012的复制方式为滚环复制,属于滚环复制pT181家族成员,尚未发现该质粒编码相关益生功能蛋白。