生物柴油是由动植物油脂转化得到的环保型可再生能源。生物酶法合成生物柴油具有反应条件温和，无污染物排放等优点，是近年来的研究热点。针对目前生物酶法制备生物柴油反应过程中酶易失活，使用寿命太短，从而导致生产成本过高的问题，本论文采用在有机介质叔丁醇中酶促油脂甲醇解反应制备生物柴油的新方法，并系统研究了叔丁醇反应介质中，脂肪酶催化油脂转化为生物柴油的催化特性。首先考察了叔丁醇介质中，酶促精制大豆油甲醇解制备生物柴油时脂肪酶的活性，对影响脂肪酶活性的因素和反应条件进行了优化，并提出了脂肪酶二步催化油脂的工艺。在优化的反应条件下，生物柴油得率可达93％，在原来的基础上缩短了一半的反应时间，从而降低了能耗。论文研究了油脂中磷脂、水分等因素对酶活性的影响。磷脂对LipozymeIMTL存在可逆抑制，但对Novozym 435产生的负面影响不可恢复；当反应体系中的水活度超过0.44，油脂的最终转化率开始明显降低；油脂中含游离脂肪酸时，脂肪酸比中性油脂更易被转化为生物柴油，但游离脂肪酸甲酯化生成的水会影响油脂转化成生物柴油的最终得率。此外，副产物甘油在反应体系中的累积和反应体系PH值同样影响着酶促油脂甲酯化反应的进行。论文采用叔丁醇萃取蓖麻油在脂肪酶催化下制备生物柴油。将原本作为反应溶剂的叔丁醇作为萃取剂萃取蓖麻籽粉中的蓖麻油，并将萃取蓖麻毛油直接用作生物柴油的反应原料。从提油率和萃取毛油中的磷脂含量两方面考虑，通过正交试验选出了最合适的提油条件：溶剂用量为蓖麻籽粉的6倍，提油时间4小时，提油温度25℃，提油率为63％，磷脂含量为0.037％。采用蓖麻油作原料酶促甲酯化反应制备生物柴油比以大豆油为原料要节约反应时间，能够大量的降低能耗。