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Gpr168 又名 Mas related GPR family member F(MRGPRF),是一段人类特有的基因,由三段外显子构成。Gpr168在细胞内转录翻译,经修饰加工后形成包含有343个氨基酸组成的G蛋白偶联受体蛋白。与大多数G蛋白偶联受体相同,Gpr168也具有七个跨膜结构域。目前发现Gpr168在皮肤癌细胞中低表达,猜测Gpr168可能在皮肤癌中有类似抑癌基因的功能,拟通过对Gpr168在皮肤癌发生发展过程中的作用,初步探索其机制。前期研究,通过real-time PCR实验技术,发现Gpr168在皮肤癌细胞中表达量较低,鉴于皮肤癌中Gpr168的表达较正常组织低很多,所以在接下来的研究中构建了 Gpr168的过表达质粒载体(绿色荧光标记),经限制性内切系统(Nhe1+Not1)进行了鉴定后,再利用HEK293T慢病毒包装系统转染,收集病毒后感染皮肤癌细胞系(A431/A375/Sk-mel-5/A875)及正常的皮肤角质细胞系(HaCaT),并通过real-time PCR和Western blot技术鉴定了过表达细胞系的建成。利用建成的细胞系,我们通过Growth Curve、Wound healing、Transwell及BrdU染色等实验,证实了皮肤癌细胞过表达Gpr168后,细胞的增殖明显受到抑制,但在正常皮肤角质细胞中过表达后,细胞的增殖没有受到明显影响。根据细胞表型实验结果,由于显微镜下观察未发现有细胞凋亡及衰老的表型,推测皮肤癌细胞过表达Gpr168后导致了细胞周期停滞从而抑制细胞增殖。通过细胞流式实验检测了细胞周期,发现过表达Gpr168后,皮肤癌细胞在G0/G1期有阻滞现象。综上所述,本实验已成功建立了稳定过表达Gpr168的皮肤癌细胞系及正常的皮肤角质细胞系,已经从细胞表型实验上证明了 Gpr168对皮肤癌细胞的增殖和迁移起到抑制作用,而对正常的皮肤角质细胞没有影响。初步推测在皮肤癌细胞系中过表达Gpr168后导致细胞周期停滞抑制细胞增殖,并初步通过细胞流式技术和Western Blot实验初步探索了 Gpr168对细胞周期的影响,为下一步探索Gpr168蛋白在皮肤癌细胞内的作用机制提供了更明确的实验方法和思路,为揭示Gpr168在皮肤癌中发生发展的机制研究奠定一定的理论基础。