乌骨山羊胚胎移植及群体遗传分化水平的研究

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本研究采用超数排卵、同期发情及群体遗传分化分析的方法研究乌骨山羊,以期待从育种水平和分子水平为乌骨山羊品系快速扩大、品种保护、评价、利用等提供参考。实验一以乌骨山羊为实验对象,在湖北省通山县优美特生态农场进行乌骨山羊胚胎移植实验,结果表明:1.对供体羊注射不同产地的进口FSH,超排剂量为9.6mg,平均采胚数为8.11+3.18,平均可用胚数为6.22±1.43,可用胚比率达到71.23±20.32%;新西兰产FSH与加拿大产FSH的超排结果差异不显著,即不同产地的FSH对超排结果没有显著影响,在实际生产中可以考虑国产的FSH以降低经济成本。2.采用CIDR+PG+PMSG方法处理受体,诱导同期发情,可以获得良好的效果。澳大利亚生产的PMSG发情率达到88.6%,宁波生产的PMSG发情率只达到了75.9%,相比较同期发情结果,澳大利亚的PMSG效果明显优于国产,并且差异显著(P<0.05)。3.应用进口栓进行同期发情实验,受体母羊发情主要集中在撤栓后的24~48h处,集中发情率最高达到54.5%。4.三个山羊品种相比较同期发情效果,黑山羊发情率达到85%,波尔山羊为80%,奶山羊为86.1%,奶山羊略优于其他两个山羊品种,但三者之间差异并不显著(P>0.05)5.分别给受体母羊移植1枚、2枚、3枚鲜胚,妊娠率分别为63.6%、60.0%、57.1%,移植1枚、2枚和3枚鲜胚的受胎率差异显著(P<0.05)。从胚胎利用最大程度化来讲,可以移植1枚A级胚胎,对等级较低的胚胎则可以适当多移植几枚。6.黄体直径大于0.5cm受体的妊娠率为62.50%,直径在0.3cm-0.5cm之间的黄体妊娠率为57.12%,直径小于0.3cm的黄体妊娠率为66.67%,三组之间的差异不显著,黄体的大小不影响妊娠率。实验二本研究利用乌骨山羊、乐至黑山羊、建昌黑山羊、辽宁绒山羊、成都麻羊、承德无角山羊、南江黄羊、奴比山羊、马头山羊、波尔山羊、简阳大耳羊、北川白山羊、湘东黑山羊、金堂黑山羊共计14个山羊品种为材料,PGR、GnRHRFSHββ、INHβA、LHβ为候选基因,采用PCR—SSCP技术检测SNP位点,并通过基因频率和基因型频率进行群体遗传分化水平分析,为乌骨山羊的遗传评估做了初步的分析。研究结果表明:1.在5个候选基因中共检测到6个SNP位点,分别为PGR基因5’调控区中的-31G/A突变;GnRHR外显子1中714bp处缺失A,731bp处插入G;FSHββ基因中5’调控区中的-856G/T突变;INHβA外显子2中的80T/C突变;LHβ外显子2中的153C/A和64T/C突变。6个SNP位点依次命名为PGR、GnRHR、FSHβ、INHβA、LHp-1、LHβ-5。2.6个SNP位点在不同的山羊品种中的基因型分布差异显著(P<0.05)。6个多态位点为中性座位,14个山羊品种的群体观察杂合度(Ho)为0.2172~0.6830;期望杂合度(He)为0.2100~0.4571;有效等位基因数(Ne)为1.4241~1.8329;多态信息含量为0.1990~0.3348;Shannon多样性指数0.4092~0.6734。3.14个山羊群体的F-统计结果显示:Fit为-0.576; Fst为0.029;Fis为-0.623。表明2.9%的遗传变异是群体间变异,而97.1%遗传变异是群体内变异。绝大部分变异存在于各品种内,说明品种间遗传分化程度非常低。4.乌骨山羊的观察杂合度(Ho)为0.2818,期望杂合度(He)为0.3110,Ho小于He,表明在乌骨山羊群体内纯合子个体较多,种群可能受选择、突变和遗传漂变等因素的影响。5.基于Nei氏标准遗传距离聚类分析表明,国外品种聚为一类,马头山羊单独聚为一类,其他的11个山羊品种聚为3类。马头山羊与乐至黑山羊的遗传距离最大为0.2829,Nem最小0.778;在整个山羊群体中,乌骨山羊与简阳大耳羊的遗传距离最小为0.0105,Nem最大20.0752,是亲缘关系最为密切的。
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