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水牛是中国南方地区较为重要的一种家养动物,在农业耕作上一直将其作为劳力使用。近些年来随着对水牛研究的不断深入,其经济利用价值逐渐显现出来,特别是将其作为生物反应器生产目的蛋白。目前尚未建立生物学特性明确的水牛细胞系,限制了在细胞水平研究和长期保存水牛种质资源,也妨碍了通过将稳定表达外源基因的细胞作为核移植供体,获得基因改造水牛的研究。因此,建立水牛细胞系并对其进行生物学特性的研究非常重要。从南宁市内屠宰场获取88只水牛胎儿,对其耳缘、肾脏、皮肤进行原代培养,从分离获得的成纤维细胞中挑选出形态正常、生长动力学较好的细胞系,最后挑选出2个水牛胎儿皮肤成纤维细胞系(BFSF101107、 BFSF101007)、1个水牛胎儿耳缘成纤维细胞系(BFEF)、1个水牛胎儿肾脏成纤维细胞系(BFKF)、1个水牛胎儿肾脏扁平状成纤维细胞系(BFKF-Flat)。然后对这些细胞系分别进行生长动力学测定、冻存前/复苏后活率测定、微生物污染检测、核型分析、同工酶检测、荧光蛋白转染效率、细胞周期分析。这5个细胞系生长动力学测定结果所绘制的生长曲线都为“S“型；细胞冻存前、复苏后都具有较高的活率；微生物污染检测的结果均为阴性。对这些细胞系进行核型分析和同工酶分析检测是否存在细胞交叉污染,结果显示这些细胞绝大多数含有48条染色体(20代),同工酶电泳图谱显示细胞系之间没有交叉污染。相同转染条件下,在绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白的表达效率上BFSF101107的最高,在表达强度上BFKF-Flat的最强。接着,对各细胞系第20代细胞进行细胞周期分析,结果BFSF101107与他细胞系相比,细胞之间染色体均一性好、畸变概率低。因此,基于细胞的后续研究可以依据这些细胞系的不同生物学特性进行相应的选择。在无抗生素条件下,成功建立了2个水牛胎儿皮肤成纤维细胞系(BFSF101107、BFSF101007)、1个水牛胎儿耳缘成纤维细胞系(BFEF)、1个水牛胎儿肾脏成纤维细胞系(BFKF)、1个水牛胎儿肾脏扁平状成纤维细胞系(BFKF-Flat),并成功将各细胞系传至第30代。从各细胞系检测指标上来看,皮肤来源的成纤维细胞要优于其他组织来源的,本研究的结果为其他大型动物成纤维细胞系的建立提供了参考。