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Wnt家族蛋白及其受体、调节蛋白等共同组成了复杂的信号通路,在动物的发育与干细胞命运的调控方面都起着重要的作用。Wnt信号通路不仅直接促进造血干细胞的自我更新,而且还通过影响造血干细胞微环境而间接地影响造血干细胞的功能。Wnt家族成员之一Wnt3a在造血干/祖细胞自我更新的过程中发挥着重要的作用。鉴于此我们通过构建携带Wnt3a基因的腺病毒感染原代小鼠骨髓基质细胞,建立转基因滋养层细胞。通过与脐血CD34~+造血干/祖细胞的共培养研究转基因滋养层细胞扩增CD34~+造血干/祖细胞的作用。实验结果显示,与普通滋养层加细胞因子组相比,转基因滋养层加细胞因子组培养的CD34~+造血干/祖细胞集落形成能力(CFC)是其1.55±0.06倍;混合集落形成能力是其1.95±0.26倍;高增殖潜能集落形成能力(HPP-CFC)是其1.45±0.40倍;LTC-IC活性是其3.83±0.86倍。结果表明Wnt3a转基因滋养层细胞通过分泌Wnt3a蛋白,实现其体外扩增造血干/祖细胞的作用。 我们在转Wnt3a滋养层细胞成功培养扩增CD34~+造血干/祖细胞的实验基础上,对扩增得到的CD34~+造血干/祖细胞的系分化潜能进行了研究。实验结果显示,经转Wnt3a滋养层作用后的CD34~+造血干/祖细胞的CD33表达水平无明显变化,而CD117和CD71的表达水平与对照相比明显升高;BFU-E/CFU-E等红系集落数目也明显高于对照;在建立的红系诱导分化体系中,经Wnt3a作用后的CD34~+造血干/祖细胞CD117和CD71的表达水平也高于对照。由此可见Wnt3a具有提高CD34~+造血干/祖细胞红系分化潜能的作用。Wnt3a的这种作用很可能是通过激活β-catenin信号通路上调HOXB4表达从而影响GATA-1、EKLF等红系分化相关转录因子的表达水平来实现的。