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目的:选择HCMVpp65基因中能激发CTL和B细胞免疫的优势抗原表位基因pp65(1087-1515nt)基因片段，PCR扩增片段，构建表达载体并在原核细胞中进行功能性表达，进一步鉴定表达蛋白的抗原性；构建酵母pPIC9K-pp65真核表达载体。
方法:参考pET-21a(+)载体序列多克隆位点，根据pp65(1087-1515nt)基因序列设计引物，碱性质粒抽提法提取含有HCMVpp65全长基因的pGEM-T-pp65质粒，通过聚合酶链反应(PCR)获得目的pp65(1087-1515nt)基因。PCR产物经BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切、T4连接酶连接、蓝白斑筛选构建pET-21a(+)-pp65质粒；经酶切鉴定及核酸序列测定后，将重组质粒转入BL21(DE3)诱导表达；表达的蛋白进行SDS-PAGE电泳并经western blot鉴定pp65融合蛋白的抗原性；包涵体蛋白经过复性纯化包被聚苯乙烯微量反应板，ELISA法检测pp65融合蛋白的抗原性。参考pPIC9K载体序列多克隆位点，根据pp65(1087-1515nt)基因序列设计引物，以pGEM-T-pp65质粒为摸板，PCR获得目的pp65(1087 -1515nt)基因。PCR产物与pMD19--T simple载体连接，蓝白斑筛选构建的pMD19--T simple-pp65质粒，经酶切、测序鉴定后，以SnaB Ⅰ和BlnⅠ酶切pMD19-simple-pp65质粒和pPIC9K载体，T4连接酶连接，转化至DH5 α感受态细胞。
结论:构建了稳定的pET-21a(+)-pp65原核表达体系，获得了具有活性、纯度较高的pp65蛋白片段，此外也成功构建了酵母表达载体pPIC9K-pp65，为大量制备活性pp65蛋白片段、HCMV感染检测试剂的研发和HCMV亚单位疫苗制备提供基础，也为进一步研究pp65的生物学功能奠定实验基础。