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色素万寿菊(Tagetes erecta)花朵可以提取天然色素“叶黄素”,广泛应用于医药、保健、食品等行业,因此具有较高经济价值;同时,色素万寿菊是一种观花期较长的花卉,大面积种植具有较好的景观效果,带动当地生态旅游产业的发展。基于上述两点,色素万寿菊已成为北京市延庆县四海镇支柱花卉产业之一。但是,由于连作年限的增加和雨季来临时沟域内空气湿度较大,导致四海色素万寿菊病害频发,严重影响产量和景观效果。本论文采取病害田间调查,病原物分离与鉴定,室内抑菌实验,田间药剂防治试验、生态套种试验、抗病基因克隆等研究方法,拟研制出减轻色素万寿菊褐斑病发生的适宜药剂防治配方、生态套种技术;同时克隆出类甜蛋白基因,为未来通过基因改良等手段提高色素万寿菊抗病性奠定基础。研究结果如下:病害田间调查发现:四海色素万寿菊前期主要病害为病毒病,根腐病,疫病,褐斑病;后期病害主要为褐斑病。生产过程中,褐斑病对产量和景观效果影响最为明显。从发生褐斑病的色素万素菊上采集病叶,分离并纯化病原物菌株。通过显微观察初步鉴定为链孢属(Alternari sp.);通过ITS分子生物学技术,准确鉴定为极细链格孢(Alternaria tenuissima)。系统树分析显示,极细链格孢与其他种链格孢有一定遗传关系、也有明显区别。室内抑菌实验发现:代森锰锌、世高、异菌脲、丙环唑、福星等药剂具有较好抑菌效果。田间药剂防治试验发现:“10%世高750倍液+60%1嘧菌脂3000倍液”和“10%世高750倍液+60%百泰1500倍液”防治效果最好;“20%丙环唑2000倍液+70%代森锰锌750倍液”的防治效果较好;“枯草芽孢杆菌600倍液”也具有较好的防治效果,这为褐斑病生物防治及色素万寿菊生态安全生产提供了线索。生态套种试验发现:在四种不同的套种模式中,“万寿菊-荷兰土豆”生态套种的经济价值最高,病害减轻效果最明显,观赏时间延长、观赏效果增加,是最适宜推广的生态套种模式。运用PCR和RACE技术,从万寿菊中分离出类甜蛋白基因(TLP)。该基因全长cDNA 880bp,开放阅读框编码223个氨基酸。生物信息学分析表明:万寿菊类甜蛋白氨基酸序列的分子量为23933.8 Da;理论等电点6.51;分子式为C1051H1587N295O327S18;总原子量为3278;消光系数(280mm)为26440;脂肪系数:54.22;属稳定蛋白。在N-端具有22个氨基酸构成的疏水性信号肽和跨膜结构域。万寿菊类甜蛋白基因与向日葵PR5蛋白相似性为99%,与其他植物类甜白蛋白也有较高相似性。采用半定量技术,检测了TLP基因的表达变化。研究发现:健康植株中茎、叶、花组织中均检测不到TLP表达。植株被病害侵染后,茎、叶、花均能检测到TLP基因表达,花中TLP基因表达明显低其它器官。