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背景与目的：鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma，NPC)是我国南方地区的一种常见恶性肿瘤，NPC的主要治疗手段为放射治疗，但总的效果仍不够理想，NPC放疗后5年生存率仍然徘徊在40-50％。p53基因是一种重要的抑瘤基因，参与DNA损伤后修复，调控DNA损伤所触发的细胞周期运行及细胞凋亡，介导肿瘤的放射生物学效应，因此，p53与肿瘤的放射敏感性密切相关。功能失活的p53基因则不具备这些功能，导致肿瘤对放射敏感性降低，甚至使肿瘤产生放射抗拒。研究表明，60％以上的NPC组织和几乎100％的NPC细胞株有p53蛋白过表达，而且NPC中过表达的p53蛋白的功能可能异常或失活。但至今NPC中过表达的p53蛋白对NPC的放疗敏感性有无影响仍然不清楚，p53蛋白介导NPC放射应答的机制仍然需要进一步阐明。因此，观察过表达的p53蛋白对NPC放射敏感性的影响，寻找与p53介导放疗敏感性相关的蛋白质，将有助于阐明p53参与NPC放射应答的机制。
方法：(1)p53沉默对人鼻咽癌细胞株CNE2放射生物学特性的影响：以稳定沉默p53基因表达的NPC细胞株CNE2sip53和对照细胞株CNE2/pSUPER为对象，采用集落存活分析法检测在不同放射剂量照射后的细胞存活分数(SF)并计算放射生物学参数D0，α，β和放射敏感比(SER)；采用MTT法检测放射线对细胞生长的影响；采用流式细胞术和Hochest33342染色检测放射线对细胞周期及凋亡的影响；(2)蛋白质组学技术寻找与p53介导CNE2细胞放疗敏感性相关的蛋白质：采用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离CNE2sip53以及CNE2/pSUPER细胞放射前后的蛋白质，PDQuest图像分析软件识别CNE2sip53以及CNE2/pSUPER细胞放射前后的差异蛋白质点，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异蛋白质；Western blot验证差异蛋白质HSP70、Tcp-1β、Annexin A2和14-3-3σ在CNE2sip53以及CNE2/pSUPER细胞放射前后的表达水平。
结果：(1)CNE2sip53细胞照射后的SF值高于CNE2/pSUPER细胞的SF；与CNE2/pSUPER细胞相比，CNE2sip53细胞照射后D0值和SF2值均增大，而α值，β值和SER均减小；(2)放射线诱导CNE2sip53细胞凋亡及对细胞增殖的抑制作用弱于其对CNE2/pSUPER细胞的作用；(3)放射线诱导CNE2/pSUPER细胞阻滞于G1期，而诱导CNE2sip53细胞阻滞于G2期；(4)建立了CNE2/pSUPER以及CNE2sip53细胞放射前后的二维凝胶电泳图谱，质谱分析鉴定了CNE2/pSUPER细胞放射前后的19个差异蛋白质以及CNE2sip53细胞放射前后的15个差异蛋白质，Western blot验证了14-3.3σ、HSP70、Tcp-1B和Annexin A2在两种细胞放射前后的差异表达水平；(5)对CNE2/pSUPER以及CNE2sip53细胞放射前后的差异蛋白质的异同进行比较分析，识别了14个不同的差异蛋白质，既Pyrophosphatase 1、Annexin A1、14-3-3 protein sigma、Proteasome(prosome，macropain)subunit、Prohibitin、Peroxiredoxin-2、Glutathionetransferase，GRg78 precursor，Cytokeratin 18，Ras-related protein，Glutathione transferase omega 1-1、NM23-H1、Calmodulin-relatedprotein和Electron transfer flavoprotein subunit alpha；生物信息学分析显示，其中7个蛋白质即Annexin A1、14-3-3 protein sigma、Proteasomesubunit、Prohibitin、Glutathione transferase、GRP78 precursor和Cytokeratin 18与p53存在直接或间接的相互作用关系。
结论：(1)NPC细胞中过表达的p53蛋白具有生物学功能，参与放射诱导的NPC细胞损伤和凋亡过程；(2)采用2-DE技术建立了CNE2sip53以及CNE2/pSUPER细胞放射前后的二维凝胶电泳图谱，质谱分析鉴定了19个CNE2/pSUPER细胞放射前后的差异表达蛋白质以及15个CNE2sip53细胞放射前后的差异表达蛋白质，为研究NPC放射生物学提供了有价值的资料；(3)发现了14个不同的CNE2/pSUPER和CNE2sip53细胞放射前后的差异蛋白质，这14个蛋白质可能与p53介导NPC放疗相关，为阐明p53参与NPC放射应答的机制提供了实验依据。