油菜中丙溴磷污染的检测及其生物标志物的探讨

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目的丙溴磷(Profenofos)是新型有机磷类广谱杀虫剂,具有高效、广谱、内吸、低残留等特点,主要是通过抑制昆虫乙酰胆碱酯酶对害虫具有触杀和胃毒作用,来达到除虫效果,在蔬菜病虫害防治上效果明显,使用量日渐增多,因在蔬菜上的使用而产生的污染不容忽视。虽然少量的丙溴磷残留不会对人体造成立即的、直接的毒害,但是丙溴磷的分子结构比较稳定,在生物体内很难被代谢分解、排泄,长期食用这种受污染的蔬菜可导致癌症、不孕症、内分泌紊乱等疾病。大量进食超标蔬菜,会危害神经中枢,以致痉挛而死。目前一般通过检测蔬菜中农药的残留来判断蔬菜受农药污染的程度,所以对蔬菜中农药残留量测定的研究报道较多,但多不够简便、快速、高效,本研究意在建立一种简便、快速、高效的丙溴磷残留量检测技术,满足执法者和消费者的迫切需要。同时通过对丙溴磷胁迫后油菜的抗氧化酶系及抗氧化分子的检测,寻找一种或多种蔬菜中比较敏感的生物标记指标,作为丙溴磷污染蔬菜的早期诊断指标。方法1.田间实验本实验在春天采用田间实验的方法,对油菜地分别喷洒高低两种不同浓度的丙溴磷,每隔2d喷药一次,共喷施3次。最后一次喷洒丙溴磷农药0d、1d、3d、5d、7d、9d、11d后,按双对角线法取样分别进行农药残留和抗氧化物酶活性(过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶)、抗氧化分子(谷胱甘肽、维生素C)及抗氧化产物丙二醛的检测。2.丙溴磷残留测定采用丙酮/正已烷提取,活性炭净化,旋转蒸发仪浓缩,GC-FPD(气相色谱-火焰光度法)法检测其含量。3.生物标志物检测过氧化物酶(POD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)含量、维生素C(Vc)含量和丙二醛(MDA)的含量分别采用愈创木酚法、紫外吸收法、氯化硝基四氮唑蓝(NBT)光照还原法、Ellman法、碘量法和硫代巴比妥酸法。结果1丙溴磷残留动态研究丙溴磷在油菜中的平均加标回收率为96.3%~104.7%,精密度为3.6%~4.8%;并用此法对丙溴磷在油菜中的残留量进行了动态研究,结果表明,高低浓度处理组丙溴磷在油菜中的降解非常迅速,低浓度处理组的降解方程y=127.15e-0.4348x,半衰期为1.59天;高浓度组的降解方程y=1332.4e-0.4164x,半衰期为1.66天。2丙溴磷对油菜POD活性的影响两种浓度丙溴磷迫胁后,丙溴磷对油菜的POD活性影响显著,处理组POD活性明显高于对照组,高浓度组丙溴磷对POD的诱导作用明显高于低浓度组。低浓度组在停止施药后第3d POD活性达到最大值,在第9d左右POD活性恢复到与对照组基本接近;高浓度组在停止施药后第5d POD活性达到最大值,在第11d后POD活性恢复到与对照组基本接近。3丙溴磷对油菜CAT活性的影响低浓度组CAT活性被明显诱导,高于对照组,并高于高浓度组,于第5dCAT活性达到最高值,此后逐渐下降,在第9d左右与对照组基本达到一致;高浓度组CAT活性呈现先诱导后抑制的趋势,在第3d达到最高值,并于第5d后低于对照组。4丙溴磷对油菜SOD活性的影响施用丙溴磷后,高、低浓度处理组的SOD活性均明显高于对照组,高浓度组SOD活性高于低浓度组。低浓度处理组的SOD活性3d后开始明显升高,第5d达到最大值,此时,SOD活性为对照组的1.4倍,此后逐渐降低,11d左右与对照组基本达到一致;高浓度组SOD活性第7d达到最大值,此时,SOD活性为对照组的1.7倍,此后逐渐降低,至11d后SOD活性仍高于对照组。5丙溴磷对油菜MDA含量的影响两个处理组MDA含量均高于对照组,高浓度处理组MDA含量高于低浓度组,最后一次施药当天(0d),高浓度处理组MDA含量即为对照组的1.5倍,低浓度处理组为对照组的1.3倍,且两组MDA变化趋势相同,均为逐渐降低。6丙溴磷对油菜中GSH含量的影响两个处理组GSH表现出相似的变化趋势,即在胁迫初期GSH含量急剧降低,低浓度处理组在第5d GSH下降到最低点,高浓度处理组GSH在第7d下降到最低点,此后两组GSH含量逐渐开始升高,低浓度组在第11d左右与对照组基本达到一致。7丙溴磷对油菜中Vc含量的影响施药后油菜Vc的含量降低,在最初几天内最为明显,表现为明显的胁迫作用,此后,Vc含量逐渐回升,到第7d恢复到与对照组基本接近。结论1.本实验所采用的前处理及检测方法适合蔬菜中有机磷农药残留的快速检测。2.丙溴磷农药在蔬菜体内降解迅速。3.POD、SOD、CAT、MDA、GSH、VC均可作为丙溴磷胁迫油菜的生物标志物。
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