基于纳米磁珠的水体中蒽快速检测方法的建立

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多环芳烃(PAHs)主要来源于有机物热解或不完全燃烧,是一类广泛存在于自然环境中,具有致癌性和致突变性的持久性有机污染物,近年来,PAHs在河流、湖泊、海域等水体中被相继检出,引发严重的生态风险。目前,PAHs的检测主要依赖于仪器检测、细胞检测和免疫学检测等手段。其中,免疫分析技术以其高效快速、灵敏准确、操作简便等诸多优点,被越来越多地应用到水体中PAHs的检测中。本文以环境中优先控制PAHs中的蒽(ANT)为目标,将小分子ANT分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备完全抗原ANT-BSA和ANT-OVA。使用ANT-BSA免疫Balb/c小鼠,取免疫后小鼠的腘淋巴结细胞或脾细胞与SP2/0细胞融合后,筛选到2株杂交瘤细胞D3和H8。体内诱生腹水法大量生产腹水后,使用亲和层析法纯化得到抗蒽单克隆抗体。用纯化后的单抗建立了酶标板间接竞争酶联免疫吸附试验(ic-ELISA)和磁珠(IBM)ic-ELISA两种检测方法,并对两种检测方法的检测条件进行了优化。酶标板-ic-ELISA检测蒽的线性回归方程是Y=0.4253x-0.1883,R2=0.9901,线性检测范围为4.76ng/mL~362.16ng/mL,最低检测限为3.65ng/mL。蒽的半数抑制浓度为41.53ng/mL,与芘交叉反应率为5.80%,与其他14种PAHs的交叉反应率皆小于1%。平均板内变异系数为5.95%,平均板间变异系数为12.86%。模拟样本检测,回收率在100.07%~111.08%之间。分别从长春、大庆、锦州、北京四地采集了一份水样进行检测,样品中蒽的含量分别为5.63ng/mL、13.78ng/mL、4.42ng/mL和4.65ng/mL,自来水中未检出。IBM-ic-ELISA检测蒽的线性回归方程是Y=0.3128x+0.0383,R2=0.9761,线性检测范围为1.575~568.585ng/mL,最低检测线为2.431ng/mL。平均板内变异系数为8.28%,平均板间变异系数为13.44%。模拟样本检测,回收率在101.59%~106.77%之间。对上述4个样本进行检测,样品中蒽的含量依次为4.28ng/mL、12.42ng/mL、4.17ng/mL和5.13ng/mL。
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