单核细胞增生性李斯特菌(Listeria Monocytogenes，LM)是李斯特菌属的重要成员，属于细胞内寄生的革兰氏阳性杆菌。目前在病原学上已被世界普遍公认为一种人畜共患病和食源性疾病的病原菌，能引起人、畜及禽类的李斯特菌病，人及动物感染后则主要表现为脑膜炎、败血症、流产和单核细胞增多。该菌广泛存在于自然界中，对外界环境的抵抗力强。食品中存在的LM对人类的食品安全存在较大威胁，是冷冻食品中威胁人类健康的主要病原菌之一。 本研究在广州市内10家超市采集了734份冷冻食品样品，通过选择性培养基分离培养、生化鉴定、BIOLOG全自动细菌鉴定系统鉴定和API Listeria试剂条鉴定等方法，共分离鉴定出31株李斯特菌，检出率为4.22％。其中有12株是LM，检出率为1.63％。本研究对12株分离自冷冻食品的LM及5株分离自本地家禽产品的LM的iap基因进行扩增、克隆测序及序列分析。结果表明，这17株LM分离株的iap基因核苷酸序列相似性达95.7％～100％，它们与国内标准株的核苷酸序列相似性达95.7％～99.9％，与国外3株分离株的核苷酸序列相似性达95.1％～100％。由此可见，iap基因在不同地区不同来源的LM分离株中保守性强，适合作为检测LM的靶基因。 LM的致病性涉及多个毒力因子，如内化素、溶血素、p60蛋白等，p60蛋白由iap基因编码。本研究对p60蛋白的抗原表位进行了预测，发现p60蛋白的134～162位和270～364位非常符合抗原表位的特点，据此设计特异引物成功扩增出覆盖这两个抗原表位区域的iapKW片段，将该片段克隆到原核表达载体pET-28a中，利用IPTG诱导表达获得约40kDa的重组蛋白，Western Blot检测表明，该重组蛋白与兔抗LM阳性血清具有良好的反应性。以该重组蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠，获得的小鼠抗体与灭活的LM全菌具有良好的反应性，以该重组蛋白作为包被抗原，以辣根过氧化物酶标记的羊抗鸡IgG作为二抗建立的间接ELISA方法可用于检测实验感染或免疫LM的鸡血清，而与其他非LM细菌感染阳性血清不反应，该方法特异性为100％，敏感性为91.4％。综上所述，本研究预测的LM p60蛋白抗原表位结果可靠，其表达产物具有良好的免疫原性，应用前景广阔。