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背景：
急性呼吸窘迫综合征(Acute respiratory distress syndrome, ARDS)是一种高死亡率的临床危重症。其病理特征主要为以中性粒细胞为主的炎症细胞肺内浸润，肺上皮细胞和血管内皮损伤并伴随大量富含蛋白的水肿液聚集于肺泡腔，氧合指数显著降低。2012年柏林定义规范了ARDS的定义，并将急性肺损伤(ALI)归为ARDS，从而提高了医学工作者对这一疾病的认识。虽然对ARDS的认识和研究已有半个世纪之久，但一项囊括50个国家的多中心临床研究显示，轻度ARDS死亡率为34.9%，中度ARDS死亡率为40.3%，而重度ARDS死亡率仍高达46.1%，其治疗效果依旧不理想，提示现有研究并未阐明ARDS的发病机制。外泌体(Exosome)是直径为30-200nm的，由多种细胞释放的包含蛋白、脂质、smallRNA、mRNA、microRNA和DNA等物质的小囊泡(microvesicle)，并可随外周血液循环至远隔靶器官，是器官间物质传递、信息传导的重要媒介，是一种新发现的信息传递机制，参与了危重症的发生、发展。然而，循环外泌体在ARDS的发病机制中的作用少有研究。
目的：
探讨ARDS患者血清葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78, GRP78)水平在ARDS发生、发展中的临床意义；移植小鼠循环外泌体探讨循环外泌体对ARDS的作用及机制。
方法：
①采用回顾性观察性临床研究，纳入临床诊断ARDS的患者52例作为研究对象，根据患者28天预后情况分为死亡组与存活组，收集基本临床资料，记录身体质量指数(Body Mass Index, BMI)、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHE II)评分、氧合指数(FiO2/PO2)、总住院天数和有创机械通气时间，收集住院检查结果如白细胞计数(WBC)、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)等，同时纳入20例肺炎患者、20例健康志愿者作为对照组。抽取静脉血检测并比较各组间血清GRP78水平情况。
②将小鼠分为：空白对照组(Control)、LPS致ARDS组(LPS)、外泌体组(EXO)和无外泌体血清组(SER)，LPS致ARDS模型小鼠循环外泌体和提取外泌体后的血清分别通过尾静脉注射进入正常小鼠即为外泌体组和血清组，干预2天后取标本。苏木精-伊红(HE)染色评估肺组织损伤程度，吉姆萨染色计数肺泡灌洗液(BALF)中总细胞数和多形核白细胞数，BCA法测BALF中蛋白含量，酶联免疫吸附实验(ELISA)检测BALF中白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α，髓过氧化物酶(MPO)试剂盒检测MPO活性；免疫组化检测GRP78，Westernblot检测GRP78、C/EBP同源蛋白质(C/EBP homologousprotein, CHOP )、β-连环蛋白(β-Catenin)和血管上皮钙黏蛋白(VE-cadherin)表达。
③将小鼠分为：空白对照组(Control)、LPS致ARDS组(LPS)、外泌体组(CEXO)，提取正常小鼠循环外泌体注射入ARDS模型则为外泌体组。HE染色评估肺组织损伤程度，吉姆萨染色计数BALF中总细胞数和多形核白细胞数，BCA法测BALF中蛋白含量，ELISA血清IL-6和TNF-α水平，免疫组化和WB检测GRP78表达。
结果：
①ARDS患者血清GRP78水平明显高于普通肺炎及健康体检者(P＜0.05)。与存活组相比，死亡组患者的有创机械通气时间和血清GRP78水平明显增高(P＜0.05)，而BMI、FiO2/PO2明显降低(P＜0.05)。并且，ARDS患者血清GRP78水平与其FiO2/PO2呈负相关(r=-0.55，P＜0.01)，与APACHEII评分呈正相关(r=0.39，P＜0.01)。
②与Control组相比，LPS组表现出典型的ARDS病理改变，肺损伤明显(P<0.05)，湿干(W/D)比、BALF蛋白含量明显增高(P<0.05)，BALF细胞计数、髓过氧化物酶(MPO)活性、IL-6和TNF-α水平明显升高(P<0.05)，而肺组织GRP78和CHOP表达水平明显上调而β-Catenin和VE-cadherin表达水平显著下调(P<0.05)；与Control组相比，EXO组小鼠表现出了类似反应，肺损伤明显(P<0.05)，W/D比、BALF蛋白含量明显增高(P<0.05)，BALF细胞计数、MPO活性、IL-6和TNF-α水平明显升高(P<0.05)，而肺组织GRP78和CHOP表达水平明显上调而β-Catenin和VE-cadherin表达水平显著下调(P<0.05)。
③与Control组相比，LPS组表现出典型的ARDS病理改变，肺损伤明显(P<0.05)，W/D、BALF蛋白含量明显增高(P<0.05)，BALF细胞计数、血清IL-6和TNF-α水平明显升高(P<0.05)，而肺组织GRP78水平明显上调(P<0.05)；与LPS组相比，CEXO组小鼠肺组织损伤明显改善(P<0.05)，W/D、BALF蛋白含量明显降低(P<0.05)，BALF细胞计数、血清IL-6和TNF-α水平明显降低(P<0.05)，而肺组织GRP78水平明显下调(P<0.05)。
结论：
①内质网应激参与了ARDS的发生、发展，血清GRP78的水平与患者病情程度相关，GRP78升高提示预后不良。
②LPS致ARDS小鼠的循环外泌体可触发肺组织内质网应激，导致肺血管内皮功能障碍并促进ARDS的发展。
③正常小鼠循环外泌体可抑制LPS致ARDS小鼠肺组织内质网应激，并减轻ARDS。
急性呼吸窘迫综合征(Acute respiratory distress syndrome, ARDS)是一种高死亡率的临床危重症。其病理特征主要为以中性粒细胞为主的炎症细胞肺内浸润，肺上皮细胞和血管内皮损伤并伴随大量富含蛋白的水肿液聚集于肺泡腔，氧合指数显著降低。2012年柏林定义规范了ARDS的定义，并将急性肺损伤(ALI)归为ARDS，从而提高了医学工作者对这一疾病的认识。虽然对ARDS的认识和研究已有半个世纪之久，但一项囊括50个国家的多中心临床研究显示，轻度ARDS死亡率为34.9%，中度ARDS死亡率为40.3%，而重度ARDS死亡率仍高达46.1%，其治疗效果依旧不理想，提示现有研究并未阐明ARDS的发病机制。外泌体(Exosome)是直径为30-200nm的，由多种细胞释放的包含蛋白、脂质、smallRNA、mRNA、microRNA和DNA等物质的小囊泡(microvesicle)，并可随外周血液循环至远隔靶器官，是器官间物质传递、信息传导的重要媒介，是一种新发现的信息传递机制，参与了危重症的发生、发展。然而，循环外泌体在ARDS的发病机制中的作用少有研究。
目的：
探讨ARDS患者血清葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78, GRP78)水平在ARDS发生、发展中的临床意义；移植小鼠循环外泌体探讨循环外泌体对ARDS的作用及机制。
方法：
①采用回顾性观察性临床研究，纳入临床诊断ARDS的患者52例作为研究对象，根据患者28天预后情况分为死亡组与存活组，收集基本临床资料，记录身体质量指数(Body Mass Index, BMI)、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHE II)评分、氧合指数(FiO2/PO2)、总住院天数和有创机械通气时间，收集住院检查结果如白细胞计数(WBC)、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)等，同时纳入20例肺炎患者、20例健康志愿者作为对照组。抽取静脉血检测并比较各组间血清GRP78水平情况。
②将小鼠分为：空白对照组(Control)、LPS致ARDS组(LPS)、外泌体组(EXO)和无外泌体血清组(SER)，LPS致ARDS模型小鼠循环外泌体和提取外泌体后的血清分别通过尾静脉注射进入正常小鼠即为外泌体组和血清组，干预2天后取标本。苏木精-伊红(HE)染色评估肺组织损伤程度，吉姆萨染色计数肺泡灌洗液(BALF)中总细胞数和多形核白细胞数，BCA法测BALF中蛋白含量，酶联免疫吸附实验(ELISA)检测BALF中白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α，髓过氧化物酶(MPO)试剂盒检测MPO活性；免疫组化检测GRP78，Westernblot检测GRP78、C/EBP同源蛋白质(C/EBP homologousprotein, CHOP )、β-连环蛋白(β-Catenin)和血管上皮钙黏蛋白(VE-cadherin)表达。
③将小鼠分为：空白对照组(Control)、LPS致ARDS组(LPS)、外泌体组(CEXO)，提取正常小鼠循环外泌体注射入ARDS模型则为外泌体组。HE染色评估肺组织损伤程度，吉姆萨染色计数BALF中总细胞数和多形核白细胞数，BCA法测BALF中蛋白含量，ELISA血清IL-6和TNF-α水平，免疫组化和WB检测GRP78表达。
结果：
①ARDS患者血清GRP78水平明显高于普通肺炎及健康体检者(P＜0.05)。与存活组相比，死亡组患者的有创机械通气时间和血清GRP78水平明显增高(P＜0.05)，而BMI、FiO2/PO2明显降低(P＜0.05)。并且，ARDS患者血清GRP78水平与其FiO2/PO2呈负相关(r=-0.55，P＜0.01)，与APACHEII评分呈正相关(r=0.39，P＜0.01)。
②与Control组相比，LPS组表现出典型的ARDS病理改变，肺损伤明显(P<0.05)，湿干(W/D)比、BALF蛋白含量明显增高(P<0.05)，BALF细胞计数、髓过氧化物酶(MPO)活性、IL-6和TNF-α水平明显升高(P<0.05)，而肺组织GRP78和CHOP表达水平明显上调而β-Catenin和VE-cadherin表达水平显著下调(P<0.05)；与Control组相比，EXO组小鼠表现出了类似反应，肺损伤明显(P<0.05)，W/D比、BALF蛋白含量明显增高(P<0.05)，BALF细胞计数、MPO活性、IL-6和TNF-α水平明显升高(P<0.05)，而肺组织GRP78和CHOP表达水平明显上调而β-Catenin和VE-cadherin表达水平显著下调(P<0.05)。
③与Control组相比，LPS组表现出典型的ARDS病理改变，肺损伤明显(P<0.05)，W/D、BALF蛋白含量明显增高(P<0.05)，BALF细胞计数、血清IL-6和TNF-α水平明显升高(P<0.05)，而肺组织GRP78水平明显上调(P<0.05)；与LPS组相比，CEXO组小鼠肺组织损伤明显改善(P<0.05)，W/D、BALF蛋白含量明显降低(P<0.05)，BALF细胞计数、血清IL-6和TNF-α水平明显降低(P<0.05)，而肺组织GRP78水平明显下调(P<0.05)。
结论：
①内质网应激参与了ARDS的发生、发展，血清GRP78的水平与患者病情程度相关，GRP78升高提示预后不良。
②LPS致ARDS小鼠的循环外泌体可触发肺组织内质网应激，导致肺血管内皮功能障碍并促进ARDS的发展。
③正常小鼠循环外泌体可抑制LPS致ARDS小鼠肺组织内质网应激，并减轻ARDS。