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左旋-二脱水伊地醇双甲磺酸酯(DMDAI-L)属于烷化剂类细胞抑制剂,主要是以甘露醇为原料,经过缩合、水解等步骤合成。据国内外文献报道,DMDAI-L具有明显的体内抗肿瘤活性,本课题组前期研究发现,DMDAI-L对人多个系统来源的肿瘤细胞生长抑制作用不明显,但是对血液系统来源的HL-60细胞有较强的针对性抑制作用,且诱导HL-60细胞凋亡。本实验以HL-60细胞为研究对象,初步探讨DMDAI-L诱导HL-60细胞凋亡的作用机制。比较DMDAI-L和其经肝微粒体孵育后对HL-60细胞的作用效果。测定DMDAI-L含药血清对HL-60细胞的增殖抑制作用。目的1.研究DMDAI-L对HL-60细胞的Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,初步探讨其诱导细胞凋亡的作用机制。2.比较DMDAI-L和其经肝微粒体孵育后对HL-60细胞的作用效果。3.测定DMDAI-L含药血清对HL-60细胞的增殖抑制作用。方法1.运用CCK-8法测定不同浓度的DMDAI-L (1.25、2.5、10、20、40、80)μg/ml作用于HL-60细胞不同时间(24h、48h)后的增殖抑制率。2.运用免疫细胞化学法和免疫蛋白印迹法分别测定各浓度DMDAI-L (0、2.5.5、10)μg/ml作用HL-60细胞48h后Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。3.运用大鼠肝微粒体体外孵育的方法孵育DMDAI-L,运用中性红染色细胞活性试验法测定DMDAI-L原药及其经肝微粒体孵育后对HL-60细胞的增殖影响。4.运用CCK-8法测定不同剂量组DMDAI-L的含药血清对HL-60细胞的增殖影响。结果1.不同浓度DMDAI-L (1.25.2.5、5、10、20、40、80)μg/ml作用HL-60细胞24h抑制率分别为(10.39、13.74、15.35、25.77、35.40、45.27、54.50)%,而48h抑制率分别为(19.11、24.17、37.98、56.82、65.82、71.61、78.11)%,作用24h、48h的IC50分别为68.54μg/ml、13.03μg/ml。2.一定浓度范围内DMDAI-L作用HL-60细胞48h后,能上调Bax的蛋白表达并能下调Bcl-2蛋白表达。3.与原药相比,DMDAI-L经大鼠肝微粒体体外孵育后对HL-60细胞增殖抑制作用减弱,原药作用于HL-60细胞24h的IC50为59.07μg/ml,而其经孵育后作用HL-60细胞24h的IC50为81.29μg/ml。4. DMDAI-L高中低剂量组含药血清作用HL-60细胞48h抑制率分别为30.29%、20.72%、13.97%,而阳性组(环磷酰胺)抑制率为18.16%,高、中、低剂量组、阳性对照组与空白对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论1. DMDAI-L诱导HL-60细胞凋亡,其作用机制与上调Bax蛋白表达及下调Bcl-2蛋白表达有关。2. DMDAI-L经大鼠肝微粒体孵育后其作用效果减弱可能与其代谢转化为活性较低的产物有关。3. DMDAI-L含药血清能够有效抑制HL-60细胞增殖。