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目的:子宫内膜癌是三大妇科恶性肿瘤之一,晚期癌或复发癌的预后很差,因此这部分病人的治疗是一个临床难题,临床迫切需要作用强且副作用小的新型抗癌药物。三氧化二砷(AS2O3)是一种新型的抗癌药物,在临床上已经成功用于治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的治疗,且对某些实体瘤体内和体外实验也证实其有良好的化疗效果,但AS2O3对子宫内膜癌的作用国内外鲜为报道。本研究通过体内和体外实验探讨AS2O3对人子宫内膜癌HEC-1-A细胞生长的抑制作用及作用机制,并全面评价其毒副作用,为临床应用AS2O3治疗子宫内膜癌提供基础。方法:1用四氮唑盐法(MTT法)检测细胞增殖活性,比较AS2O3和黄体酮、安宫黄体酮、顺铂(CDDP)对HEC-1-A细胞的抑制作用。2应用流式细胞仪检测细胞周期HEC-1-A细胞经5μmol/L AS2O3作用48 h后,蛋白酶消化,收集1×106个细胞,应用流式细胞仪检测细胞的DNA含量,分析细胞周期[4]。计算机程序拟合分析DNA分布直方图,以百分数表示各期细胞(G0/G1、S、G2/M)所占比率。在DNA分布直方图的G0/G1峰前出现一个亚峰,为细胞凋亡峰。3 DNA电泳检测细胞凋亡HEC-1-A细胞经5,10μmol/L AS2O3作用48 h后,收集5~10×106个细胞,运用苯酚-氯仿-无水酒精方法提取DNA[5],1.2%琼脂胶电泳后,于紫外线下观察DNA带,细胞凋亡呈典型的梯状DNA。4建立裸鼠荷人子宫内膜癌HEC-1-A细胞移植瘤动物模型,随机分为实验组即AS2O3低(4 mg·kg-1·d-1)、中(6 mg·kg-1·d-1)、高(8 mg·kg-1·d-1)剂量组、阳性对照顺铂(CDDP)组(3 mg·kg-1·d-1)及阴性对照生理盐水(NS)组,腹腔连续给药14 d,计算瘤体积和瘤重量抑制率,观察用药前后裸鼠体重改变。5毒副作用分析:于停药后第2日称体重,“摘眼球”法处死裸鼠,收集血液用于血常规检测,血清用于肝肾功能检测;检测肿瘤组织以及心、肝、脾、肺、肾和子宫的湿重,各脏器制成蜡块用于病理检测。6运用统计软件SPSS 11.5对数据进行统计分析。结果:1体外实验结果显示:AS2O3和CDDP浓度在1~20μmol/L时可显著抑制细胞生长,且AS2O3>CDDP。AS2O3(5μmol/L)作用后导致细胞凋亡,S和G2/M细胞周期阻滞。2体内实验结果显示:低、中、高剂量AS2O3组和CDDP组肿瘤体积抑制率分别为:50.97%、75.58%、56.92%、52.23%;肿瘤重量抑制率分别为:10.15%、29.33%、16.67%、14.69%,与生理盐水组比较差异均有显著性(P<0.05),可见中高剂量的AS2O3对移植瘤的抑制作用强于CDDP。3裸鼠一般情况观察:给药后不久CDDP组裸鼠活动明显减少、精神不振、食量减少,饮水量增加,日渐消瘦,出现明显恶病质表现,在处死前一天该组裸鼠死亡一只。而AS2O3各组及阴性对照组裸鼠精神状态及活动均良好,AS2O3各组裸鼠饮食增加。4裸鼠体重变化情况:用药前后AS2O3各组体重变化不明显,用药后CDDP组裸鼠体重平均明显下降(3.74±2.36)g,与AS2O3各组及阴性对照组之间比较差异有显著性(P<0.05)。5血常规检测结果显示:AS2O3和CDDP对血红蛋白含量无明显影响,与阴性对照组比较,差异无显著性(P>0.05);AS2O3各剂量组白细胞和血小板数目与阴性对照组相比数量降低,差异有显著性(P<0.05)。CDDP组裸鼠的白细胞、红细胞、血小板数量及血细胞比容均较阴性对照组降低,差异有显著性(P<0.05)。CDDP组与AS2O3各组比较,在红细胞、血小板数目下降方面差异有显著性(P<0.05),说明CDDP对血象的影响较AS2O3明显。6肝肾功能检测结果显示:AS2O3对肝肾功能较阴性对照组比较,无显著性差异(P>0.05),说明AS2O3对肝肾功能无影响。而CDDP组谷丙转氨酶、谷草转氨酶及、总胆红素、胆碱酯酶等各肝功能指标的数值均有不同程度的升高,AST/ALT比值下降较阴性对照组比较,有显著性差异(P<0.05),说明CDDP对肝功能有不同程度的影响,而且与AS2O3各组比较,差异有显著性(P<0.05),说明CDDP对肝功能的影响较AS2O3明显;CDDP组尿素氮有不同程度的升高,血糖值下降,较阴性对照组比较,有显著性差异(P<0.05),说明CDDP对肾功能有影响,而且与AS2O3各组比较,差异有显著性(P<0.05),说明CDDP对肾功能的影响较AS2O3明显。7主要脏器湿重比较及病理学观察:AS2O3对主要脏器湿重无明显影响,较阴性对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),而CDDP组的心、肝、脾、肾平均湿重较AS2O3各组及阴性对照组轻,比较差异有显著性(P<0.05),提示CDDP对各脏器影响较AS2O3明显。然而HE染色光镜下观察,各组裸鼠脏器均未发现明显病灶。8免疫组化学法检测移植瘤细胞中PCNA和p27蛋白表达情况:阴性对照组PCNA染色为强阳性,AS2O3中剂量组多为阴性或者弱阳性;阴性对照组p27染色均为阴性,AS2O3中剂量组多为阳性。结论:1 AS2O3体外和体内均具有很强的抑制人子宫内膜癌HEC-1-A细胞生长的作用。2 AS2O3治疗浓度的抗肿瘤作用并不是越高越好,而应该采取最适剂量,实验中以6 mg·kg-1·d-1的剂量最为合适,其抑瘤效果明显优于低、高剂量AS2O3以及CDDP。3 AS2O3通过诱导细胞凋亡和导致S、G2/M期细胞周期阻滞而抑制HEC-1-A细胞生长。体内实验进一步表明,AS2O3可能通过下调核增殖抗原PCNA的表达、上调抑癌基因p27的表达,而干扰细胞周期,抑制肿瘤的生长。4治疗剂量的AS2O3对子宫内膜癌HEC-1-A细胞的抑制作用强于CDDP,而毒副作用弱,因此AS2O3很有希望成为一种新型的子宫内膜癌治疗药物。