肠炎清对溃疡性结肠炎模型大鼠的治疗机制研究

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目的:探讨复方中药肠炎清对免疫复合法诱致溃疡性结肠炎模型大鼠的治疗作用及可能的作用机制,并探讨其对肺部并发病变的防治作用。方法:健康SD大鼠64只,雌雄各半,随机分为正常对照组(12只)和模型组(52只);模型组应用免疫复合法(抗原免疫法+TNBS/乙醇法)建立溃疡性结肠炎大鼠模型,正常组注射生理盐水。再喂养3周后,随机再造模大鼠中抽取4只处死,检查结肠病变情况,确定溃疡性结肠炎模型建立;随后将造模大鼠随机分为4组:肠炎清低剂量组(10g·kg-1),肠炎清高剂量组(40g·kg-1),柳氮磺吡啶(SASP)组(0.1g·kg-1)和模型对照组;每组12只,每天灌胃给药1次,连续给药4周。每周观察大鼠疾病活动指数(DAI);末次给药后,处死动物,解剖观察并评分结肠黏膜损伤指数(CMDI);采用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)方法测定血清IL-6,IL-8,IL-17,TNF-α水平变化;采用ELISA方法测定肺和结肠组织中分泌型免疫球蛋白A (sIgA)的含量变化;应用生化法检测结肠组织髓过氧化酶(MPO)活性;石蜡切片,HE染色,光镜下观察肺和结肠组织的病理学变化,并做组织病理变化评分(HS);采用免疫组化法(SP法)检测大鼠结肠黏膜P选择素的表达变化。结果:(1)与正常对照组相比较,模型大鼠的DAI,CMDI,肺部和结肠HS评分,结肠组织MPO活性均明显上升(P<0.01);血清中的IL-6,IL-8,IL-17和TNF-α含量显著升高(P<0.01);结肠中P选择素表达亦明显增加;肺和结肠中的sIgA含量明显减少(P<0.01);(2)与模型对照组大鼠比较,肠炎清组(10g·kg-1和40g·kg-1)的DAI评分均能显著下降(P<0.01);(3)肠炎清组(10g·kg-1和40g·kg-1)均能明显降低模型大鼠的CMDI评分(P<0.01);(4)肠炎清组(10g·kg-1和40g·kg-1)均能显著降低模型大鼠结肠组织MPO活性(P<0.01);(5)HE染色,光镜下观察结肠组织可见肠炎清组(10g·kg-1和40g·kg-1)均能抑制肠黏膜增生水肿,减少上皮脱落坏死形成溃疡及炎细胞的浸润,HS评分相比模型组明显降低(P<0.01);HE染色后观察肺组织,肠炎清组肺能阻止肺组织的间质增厚,血管扩张充血,炎细胞浸润,肠炎清组(40g·kg-1)能明显降低HS评分(P<0.05),肠炎清组(10g·kg-1)亦有降低作用,但无统计学意义(P>0.05);(6)肠炎清组(10g·kg-1和40g·kg-1)均可明显降低血清中IL-8,IL-17,TNF-α的表达(P<0.01),而肠炎清组(40g·kg-1)亦能显著降低IL-6的表达(P<0.01),低剂量也有降低作用,但无统计学意义(P>0.05);(7)肠炎清组(10g·kg-1和40g·kg-1)能明显增加结肠和肺组织中sIgA表达(P<0.01);(8)肠炎清组(10g·kg-1和40g·kg-1)能明显降低结肠黏膜上的P选择素阳性细胞数目(P<0.01)。结论:(1)肠炎清具有减轻溃疡性结肠炎模型大鼠的发病症状,改善和修复结肠黏膜组织,降低肠黏膜损伤的作用。(2)肠炎清可以降低模型鼠血清中IL-8、IL-6、IL-17和TNF-α促炎细胞因子的含量,升高肠黏膜组织中sIgA表达,从而调节模型鼠体内的免疫屏障功能。(3)肠炎清可以减少模型鼠肠黏膜上的P选择素阳性细胞数目,从而抑制血小板活化,调节细胞因子,最终减轻炎症反应。(4)肠炎清可以修复因溃疡性结肠炎引起的肺损伤,同时增加模型鼠肺组织中的sIgA表达,以加强肺部的体液免疫。
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