植物乳杆菌胞外多糖的提取及其抑制胃癌细胞增殖与诱导线粒体凋亡研究

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乳酸菌(Lactic acid bacteria,LAB)是一类特殊的革兰氏阳性菌,通常参与天然产物发酵并广泛用于生物制药与保健食品行业。它们中的大多数可以产生胞外多糖,胞外多糖对于肠道、肝脏、乳腺等多种肿瘤细胞具有抗增殖作用,它们通过多种抗肿瘤机制阻止肿瘤的发生发展,包括促进细胞凋亡、诱导细胞周期停滞以及抗诱变、抗氧化、抗血管生成和抗炎作用。本研究从西北特有的传统发酵食品浆水中分离植物乳杆菌YT013,并利用其发酵制备无细胞上清液(CCS2)以及分离代谢产物胞外多糖(EPS),分别对人胃癌AGS细胞系、结直肠癌HCT116细胞系、肝癌HepG2细胞系和胰腺癌PANC-1细胞系等进行体外实验,评估CCS2和EPS的抗肿瘤活性并探讨其潜在的分子机制。细胞增殖和周期凋亡实验表明CCS2和EPS抑制肿瘤细胞的增殖,并通过诱导细胞凋亡显著抑制AGS细胞的生长。Hoechst 33258染色和线粒体膜电位实验表明CCS2和EPS显著地降低AGS细胞线粒体膜电位,表明两者均通过线粒体凋亡途径诱导AGS细胞凋亡。Western blot结果显示CCS2和EPS可以增加BAX和BAD蛋白的表达,降低BCL-2蛋白的表达,使BAX/BCL-2的比值显著增大,同时,能够激活Caspase-3/8/9促凋亡蛋白表达。结果证明了CCS2和EPS通过Caspase依赖的内源性线粒体凋亡途径诱导AGS细胞凋亡。采用BALB/c小鼠(SPF),通过急毒性试验设计,观察记录给药后小鼠的饮食体重等变化。通过HE染色观察组织器官,评价植物乳杆菌YT013冻干粉、无细胞上清液及胞外多糖的安全性,结果表明各组分安全有效,可作为天然抗肿瘤活性候选药物或特医食品补充剂。采用水提醇沉的方法提取植物乳杆菌YT013的代谢产物EPS,通过单因素(碳源、氮源、磷酸盐、发酵时间、接种量、发酵温度以及初始pH)实验结合数学模型分析,获得最佳EPS发酵条件:初始pH为6.0,接种量5%,温度37℃,培养时间36 h,葡萄糖3%,大豆蛋白胨1.5%,磷酸二氢钾0.3%。在此条件下可获得最大EPS产量630 mg/mL,比未优化之前提高了1.31倍。通过拟合所建立的Voigt非线性模型与实验结果拟合度高,可作为EPS制备条件的数学模型。综上所述,本研究从浆水中分离纯化获得的植物乳杆菌YT013无细胞上清液及其代谢产物EPS,并探讨了CCS2和EPS对AGS细胞增殖与诱导线粒体凋亡的分子机制,评估了在体内的安全性,通过单因素优化实验与数学建模,优化了EPS产量并建立了数学模型。这些研究为研发潜在的天然抗肿瘤候选药物奠定了基础。
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