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本试验以本课题组前期从商品果胶酶中分离筛选并经紫外线诱变得到的能够产生较高活力的聚半乳糖醛酸酶的黑曲霉SH312-26-19为菌种,采用硫酸铵沉淀法、层析技术及纳升超高效液相色谱串联质谱对其发酵产生的聚半乳糖醛酸酶进行了分离纯化和鉴定,并对其酶学性质进行了研究。主要研究结果如下：1.SH312-26-19菌株麸皮发酵液经30%-80%硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-75凝胶层析和DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析后得到了具有聚半乳糖醛酸酶活性的单一蛋白峰,经SDS-PAGE检测为一条带,分子量为20.1kDa。整个聚半乳糖醛酸酶的分离纯化试验的纯化倍数为9.76,酶活回收率为22.66%,蛋白回收率为2.32%。2.将电泳凝胶上的聚半乳糖醛酸酶条带切下后进行胶内胰蛋白酶水解和纳升超高效液相色谱串联质谱,测得SH312-26-19菌株聚半乳糖醛酸酶的分子量预测值为20000Da。质谱结果在Matrix science的NCBInr 20120419数据库中进行检索,没有发现匹配分值很高的蛋白质。与同为聚半乳糖醛酸酶的gi|145232359的氨基酸序列进行同源性分析,发现蛋白序列覆盖率仅为12%。说明黑曲霉SH312-26-19所产聚半乳糖醛酸酶是一种新的聚半乳糖醛酸酶。3.本研究的聚半乳糖醛酸酶的最适作用底物pH为4.8,最适反应温度为48℃。在pH3.6-5.2保温处理1.5h后保持了75%以上的酶活性,在43-53℃之间能保持70%以上的酶活力。绝大多数的金属离子在浓度为2mmol/L时对酶活无明显影响;在浓度为5mmol/L时,Mg2+、Cu2+、Ba2+、Fe2+、Zn2+、K+有明显的激活作用,Na+有微弱的抑制作用;Ca2+在两个浓度下均有较强的抑制作用;A13+在2mmol/L时对酶活力有抑制作用而在5mmol/L有轻微激活作用。低浓度柠檬酸对酶活力有明显促进作用,较高浓度柠檬酸会显著降低酶活。4.以果胶为底物,SH312-26-19菌株聚半乳糖醛酸酶粗酶液产物中的甲醇产量显著低于商业果胶酶产物中的甲醇产量,且均低于国家对水果蒸馏酒中甲醇的最高限量。从侧面验证了本试验研究的确实是聚半乳糖醛酸酶。综上所述,黑曲霉SH312-26-19所产的聚半乳糖醛酸酶为一种新的聚半乳糖醛酸酶,它在果汁果酒等行业具有良好的应用前景和发展潜能。