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本研究包括四个部分：一、花生DNA提取、PCR反应条件优化及其栽培品种RAPD的分析；二、长叶榧（Torreya jackii Chun）的RAPD分析；三、应用RAPD技术对杉木地理种源遗传变异的分析；四、花生体细胞胚和丛生芽的诱导、再生及转化体系优化的初步研究。 在花生新鲜幼叶和干叶DNA提取过程中，应用pH值较低无机盐浓度较高的提取缓冲液沉淀蛋白质，其中加入2％的β-巯基乙醇可有效地防止因次生代谢物质引起的DNA变色。提取出的DNA样品产率约92.6～216.3ng／mg.fw之间，DNA质量和纯度较高，260nm／280nm光密度比值在1.8-1.9之间。所得DNA可直接用于限制性内切酶酶切，并可用于随机引物PCR扩增。花生RAPD理想的反应体系如下，每10ul反应体积中含：50mmol／LKCl，10mmol／LTris-HCl（pH9.0），0.1％Triton-100，20～40ng引物，0.2 nmol／ul的dNTPs，1～2ug／ul的BSA，1.5nmol／ulMgCl2，0.5～1单位Taq酶（以上均为Sangon Ltd.产品），30～60ng左右花生基因组DNA。 应用随机扩增多态性DNA技术对12个花生品种遗传多样性进行分析。从80个随机引物中筛选出20个进行扩增，共扩增出180条带，其中132条具有多态性，占73.33％。平均每个引物提供9个RAPD标记的信息量。计算了12个花生品种的遗传相似系数和遗传距离。应用Unweighted pair-group average方法进行聚类分析。聚类结果金花39-2-19和金花39-2-51距离最近，并与它们父本泉花10号聚为一类。金花101，金花103和它们的父本汕油71聚为一类。白皮1号与粤油202聚为一类。而鲁花14，中花2号，梧油6号，以及TW04各为一类。表明在DNA水平上可以分析花生品种之间的亲源关系。 以长叶榧幼叶为材料，研究结果表明最佳的RAPD反应体系为：15ul反应体系中含50mmol／LKCl、10mmol／LTris-HCl（pH9.0）、0.1％Triton-100、2nmol／ul MgCl2、0.6nmol／ul dNTPs、0.75 U Taq酶、30ng引物以及100ng左右的长叶榧基因组DNA。 利用18个引物对来自3个不同居群的66个长叶榧样本进行分析。结果表明长叶榧种群水平的多态位点百分率达：86.93％，居群水平的多态位点百分率为：83％、68％和80％。种群水平的Nei氏基因多样性指数为：0.2479，居群水平的Nei氏基因多样性指数分别为：将石自然保护区长叶榧居群0.2182、许坊埂长叶榧居群0.1684、许坊水库长叶榧居群0.1881。Shannon信息指数的分析结果与之相符，说明了长叶榧仍保留有较高的遗传多样性。长叶榧居群间的变异量占总的30.35％，居群内的变异占总的69.63％，居群间的变异量较小与基因分化系数Gst和种群间的分化度Fst的分析结果是一至的，这说明了该物种的生存空间较小，适应范围不广。长叶榧的基因流为1.6899，显示长叶榧仍具有通过群体间的基因交流来防止遗传漂变造成的群 体分化的能力。 应用随机扩增多态性 DNA技术对我国 12个有代表性的杉木地理种源 遗传多样性进行分析。从80个随机引物中筛选出20个进行扩增，共扩增出，149个 DNA片段，其中具多态性的片段有 115个，占 77．18％。表明杉木地 理种源间具有丰富的DNA序列多态性。平均每个引物提供7．45个RAPD 标记的信息量。扩增出的 DNA片段大小一般为 150到 2000hP范围之间。 12个杉木地理种源间遗传距离在0二932wt667范围之间变动。聚类结果表 明，在0．乃44处，广东信宜，广西梧州，湖南会同，湖南江华，贵州锦屏， 江西全南聚为一类。福建沙县，浙江开化，湖北咸宁，安徽休宁聚为一类。 四川雅安，陕西南郑各为一类。 以花生成熟胚培养成的无菌苗叶节为外植体，在高浓度 6－BA（30mg／L）M培养基中，光强2000Lux，25土3℃和14／10光暗比条件下 培养，50天后全部诱导分化出整齐一致的丛生芽，每个外植体平均产生8二5 个丛生芽；切下带少许丛生芽的组织块转入含6－BA（30m叭），LH（400m叭） 和YE（0刀1％）的MS培养基中，可诱导出新的丛生芽，诱导率达98．70％； 平均出芽 13．86个。将花生成熟胚轴转接于含NAA（lin。L）和 6－BA（3m叭） MS培养基中，20－30无后，诱导出大量正常的体细胞胚，诱导率达95厂％， 将胚切成小块转入含2，4－D（20m旮L），6－BA（3m乡L）和 LH（200mg／Lg／L）MS培 养基中，经15无培养，诱导出白色致密的胚性愈伤组织。S 以4 d龄的泉花10号花生小叶作为外植体，从25种培养基中筛选出 MS＋AgNO。l刀m叭＋6—BA 5刀m叭＋NAA 2．sing／L培养基为仗芽点培．养基，MS＋AgNO31刀mg／L＋6—BA 5刀mg／L十NAA刀mg／L培养基为长愈 伤组织培养基；以4d龄小叶、子叶、胚轴、及子叶与胚轴相连处为外植体 在 MS＋A酬O。l．om乡L＋6—BA 5．om叭＋NAAZ．sing／L培养基上培养，结 果表明小叶是诱导长芽?