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研究背景和目的冠心病(coronary heart disease, CHD)是威胁人类健康的重大疾病之一。流行病学调查发现,与其他发达国家生活方式相同的法国,冠心病的发病率、死亡率较低,这一现象称为“法兰西奇迹”(French Paradox)。究其原因是因为法国人进餐时饮用适量的红葡萄酒,进一步研究发现其中起主要作用的是白藜芦醇(resveratrol, Res)。白藜芦醇具有广泛的生理药理学作用,如抗氧化、清除自由基作用,抑制血小板聚集,调节血脂,防止动脉粥样硬化,抗炎,抗真菌,抗肿瘤,保肝作用等。本实验主要研究白藜芦醇对心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells, CMECs)体外模拟缺血再灌注损伤的保护作用及其相关机制。方法第一部分:CMECs的分离培养及鉴定1.取SD大鼠左心室,以酶消化法分离出心肌微血管内皮细胞,在DMEM完全培养基中培养,并定期观察;2.用Dil-A c-LDL与DAPI免疫荧光双染法鉴定细胞;第二部分:体外模拟缺血再灌注损伤,并随机分为对照组(Con组)、缺血再灌注组(I/R组)及白藜芦醇组(Res组)。1.采用MTT比色法测定CMECs活力;2.采用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测CMECs凋亡;3.底物酶解法检测caspase-3活性;4.ELISA法检测细胞培养液上清中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;5.ELISA法测定培养液上清中TNF-α和IL-10的含量。6.免疫荧光法检测NF-кB的阳性细胞率。统计学分析:数值均以(x|-)±s表示。数据采用SPSS11.0统计软件包进行统计分析,应用单因素方差分析进行统计学分析,有统计学意义的采用LSD-t检验进一步比较。结果1.细胞鉴定:细胞质呈Dil-A c-LDL阳性(红色荧光),细胞核呈DAPI阳性表达(篮色荧光),证实所得到的细胞为心肌微血管内皮细胞。2.I/R组较Con组细胞活性明显降低(P < 0.01);与I/R组比较,Res组细胞活性明显升高(P < 0.01)。3.与Con组比较,I/R组细胞凋亡率和caspase- 3的相对活性均明显升高(P < 0.01);与I/R组比较,Res组细胞凋亡率和caspase- 3的相对活性均明显降低(P < 0.01)。4.I/R组较Con组SOD的活性和MDA含量均升高(P < 0.05);与I/R组比较,Res组SOD的活性明显升高(P < 0.01),MDA含量明显降低(P < 0.01)。5.与Con组比较,I/R组TNF-α的含量明显升高(P < 0.01),IL-10的含量明显降低(P < 0.01);与I/R组比较,Res组TNF-α的含量明显降低(P < 0.01),IL-10的含量明显升高(P < 0.01)。6. I/R组较Con组NF-кB的阳性细胞率明显升高(P < 0.01);与I/R组比较,Res组NF-кB的阳性细胞率明显降低(P < 0.01)。结论白藜芦醇可减轻CMECs的缺血再灌注损伤,其作用可能与抗氧化、抗炎、减少细胞凋亡、降低NF-кB的阳性表达有关。