论文部分内容阅读
目的：观察多发性骨髓瘤（multiple myeloma, MM）患者及健康志愿者外周血γδ T细胞体外扩增情况；探讨γδ T细胞对人外周血来源未成熟树突状细胞（immature dendritic cell, imDC）转分化为破骨细胞（osteoclast cell, OC）过程的影响。方法：（1）采集MM患者及健康志愿者外周血单个核细胞（peripheral bloodmononuclear cell, PBMNC），应用1μM唑来膦酸（zoledronate, Zol）及100IU/ml重组人白细胞介素-2（interleukin-2, IL-2体外激活扩增γδ T细胞，培养第7天采用流式细胞术和细胞计数观察γδ T细胞产率；（2）由粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF）及白细胞介素-4（interleukin-4, IL-4）诱导人PBMNC转化为imDC，培养至第6天流式细胞术检测CD14、CD1a和CD51/61；imDC在细胞核因子B受体活化因子配基（receptoractivator f nuclear factor B ligand, RANKL）和巨噬细胞集落刺激因子（macrophagecolony-stimulating factor, M-CSF）作用下继续培养诱导为OC；（3）免疫磁珠分选法收集第7天的人外周血γδ T细胞，收集第6天的imDC，细胞共培养体系共培养γδ T细胞及imDC（γδ T细胞数量：imDC数量=10:1），上室为γδ T细胞，下室为imDC，于共培养7天或14天后收集下室细胞，采用以下方法了解γδ T细胞对imDC转分化为OC过程的影响：耐酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistantacid phosphatase, TRAP）染色观察TRAP+多核细胞、甲苯胺蓝染色观察牙本质片骨吸收陷窝；（4）将上述磁珠分选的γδ T细胞与培养的imDC直接接触共培养于板内（γδ T细胞数量：imDC数量=10:1），观察γδ T细胞对imDC转分化为OC过程的影响；（5）收集γδ T细胞-imDC间接共培养组、γδ T细胞单独培养组及imDC单独培养组的上清，用ELISA检测肿瘤坏死因子（tumor necrosisfactor-alpha, TNF-α）和I型胶原C-末端肽（type I collagen carboxy-terminal peptide,CTX-1）浓度，探讨γδ T细胞对imDC发挥作用的可能机制。结果：（1）Zol及重组人IL-2可在体外培养条件下大量扩增MM患者外周血γδ T细胞，扩增产率与健康志愿者无统计学差异（P>0.05）；（2）证实由外周血诱导分化的imDC在RANKL和M-CSF作用下可转分化为OC；（3）γδ T细胞与imDC间接接触共培养条件下，每低倍镜视野TRAP+多核细胞数和牙本质骨吸收面积均显著低于对照组，显示OC生成减少；（4）γδ T细胞与imDC直接接触共培养条件下，γδ T细胞亦可减少imDC诱导生成OC细胞数量的生成；（5）在γδ T细胞与imDC间接共培养条件下，CTX-1分泌水平无明显变化，TNF-α分泌水平显著增高。结论：MM患者和健康志愿者来源的PBMNC在Zol和IL-2作用下，选择性扩增γδ T细胞；激活的γδ T细胞在体外培养条件下可能抑制imDC转分化为OC过程，γδ T细胞免疫治疗有望成为骨髓瘤骨病治疗的新手段。