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目的类风湿关节炎(Rtheumatoid Arthritis,RA)是一种累及关节为主的炎性自身免疫性疾病。清热凉血祛风通络法是导师邱明义教授治疗类风湿关节炎的常用方法,本课题拟从文献整理和实验研究探讨清热凉血祛风通络法对类风湿关节炎的作用机理。实验研究是以佐剂性关节炎(Adjuvant-induced Arthritis,AA)作为RA的动物模型,观察清热凉血祛风通络法对AA大鼠T淋巴细胞亚群水平、相关细胞因子TNF-α、IL-1β以及CD4+CD25+Tregs水平的影响,旨在探讨清热凉血祛风通络法对该动物模型的作用机制,为临床治疗RA提供实验依据。方法1.理论研究:采用文献分析法,归纳中医对类风湿关节炎的病因病机及诊治的研究,为实验方治疗类风湿关节炎提供理论依据。2.实验研究:①模型制作和给药:按照随机分组方法将32只SPF级SD大鼠分为空白组(A组)、模型组(B组)、清热凉血祛风通络法组(C组)、尪痹颗粒对照组(D组)。参照文献方法,除空白组外,其余各组均于大鼠右后足底部皮下注射完全弗氏佐剂0.15ml/只,空白组以同样方法注射生理盐水0.15ml/只。造模7d后,清热凉血祛风通络法组给予中药实验方混浊液29g/(kg·d)灌胃,尪痹颗粒对照组给予尪痹颗粒混悬液1.88g/(kg·d)灌胃,空白组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续灌胃3W,每天1次。②观察AA大鼠一般情况,测量大鼠体重、足跖肿胀度、评估关节炎指数。③检测外周血T淋巴细胞亚群、相关细胞因子TNF-α、IL-1β、CD4+CD25+Tregs水平。应用SPSS17.0统计软件分析数据。结果1.理论研究:研究发现本虚标实,寒热错杂,瘀热痹阻为类风湿关节炎主要病机特点。随着疾病向缓解期的发展,“久病必瘀”、“久病入络”,虚实互见、寒热错杂的病机逐渐出现,在病邪反复作用下易产生痰浊、瘀血、热毒等病理产物,深入脏腑,伤及气血阴阳,表现为病势缠绵难愈。故以此为依据确立清热凉血祛风通络法。2.实验研究:①一般情况:除空白组外,其余各组大鼠造模6h后出现局限于注射足的肿胀,24h后达到高峰,持续3d,7-8d后出现累及膝关节的病变,皮肤出现溃疡,并有舔足,跛行,拖腿现象,对外界刺激反应低,精神萎靡,饮食、活动减少,便质稀溏,毛发干枯。继发病变于致炎后12d左右出现,表现为大鼠出现四肢对称性趾间关节肿胀,左侧后足先发病,5-7d后扩展到前足跖趾关节、踝关节,并逐渐加重。模型组大鼠精神萎靡,饮食活动减少,便质稀溏,毛发干枯,后期有明显的活动障碍。经治疗后,清热凉血祛风通络法组和尪痹颗粒对照组经治疗后大鼠精神、饮食、活动等状况总体上优于模型组。②体重、足跖肿胀度及关节炎指数变化情况:各组大鼠在同一治疗阶段的体重均值差异无统计学意义。在造模后至治疗结束过程中体重呈现为一个上升趋势。与空白组比较,其余各组大鼠的足跖肿胀度在同一治疗阶段均有统计学意义(P<0.05),肿胀度明显大于空白组。用药2w后清热凉血祛风通络法组肿胀明显减轻,与模型组比较差异有显著性(P<0.05)。与空白组比较,其余各组大鼠造模7d后大鼠表现为不同程度的关节炎症,关节炎指数差异有统计学意义(P<0.05)。③外周血T淋巴细胞亚群(CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞)百分比以及CD4+/CD8+的比值变化情况:与空白组比较,模型组CD4+T淋巴细胞水平升高、CD8+T淋巴细胞水平降低、CD4+/CD8+的比值升高,差异均有显著性(P<0.01)。与模型组比较,清热凉血祛风通络法组能降低CD4+T淋巴细胞水平;能升高CD8+T淋巴细胞水平;能降低CD4+/CD8+的比值,差异均有显著性(P<0.01或P<0.05)。④外周血血清中细胞因子TNF-α及IL-1β水平变化情况:模型组TNF-α、IL-1β细胞因子水平均升高,与空白组比较,差异有显著性(P<0.01)。与模型组比较,清热凉血祛风通络法组能降低细胞因子TNF-α、IL-1β水平,差异有显著性(P<0.01)。⑤外周血CD4+CD25+Tregs细胞百分比变化情况:模型组CD4+CD25+Tregs百分比明显降低,与空白组比较,有显著差异性(P<0.01)。清热凉血祛风通络法组能升高CD4+CD25+Tregs细胞水平,与模型组比较,差异有显著性(P<0.01)。结论1.清热凉血祛风通络法能改善AA一般情况,抑制AA鼠的足跖肿胀及关节炎指数,控制炎症的发展,减轻大鼠关节炎引起的病理损伤。2.清热凉血祛风通络法能降低AA大鼠CD3CD4淋巴细胞水平,升高CD3+CD8+淋巴细胞水平,降低CD3+CD4+/CD3+CD8+的比值,调节紊乱的T淋巴细胞亚群,从而改善免疫损伤,可能是其有效治疗类风湿关节炎的主要作用机理。3.清热凉血祛风通络法能降低AA大鼠细胞因子TNF-α、IL-1β水平,抑制RA致病细胞因子TNF-α、IL-1β分泌的作用,可能是其有效治疗类风湿关节炎的另一个重要作用机理。4.清热凉血祛风通络法能升高AA大鼠CD4+CD25+Tregs细胞水平,而达到防治类风湿关节炎的目的,可能是其有效治疗类风湿关节炎的又一个重要作用机理。