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研究目的:近年来的研究发现,SOX2与胃癌的发生发展及其恶性生物学行为显著相关。本课题拟在前期研究工作的基础上,探讨地西他滨联合顺铂对人胃癌细胞以及裸鼠移植瘤模型中SOX2基因甲基化状态的影响,明确SOX2基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达水平与人胃癌细胞以及移植瘤生长增殖的关系。方法:体外培养人胃癌细胞株BGC-823至对数生长期,地西他滨、顺铂单独或联合用药,WST-1方法分析药物处理对细胞生长增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞的体外迁移能力。同时,MSP技术检测细胞中SOX2基因启动子甲基化情况,RT-PCR、Western blot分别检测SOX2基因的mRNA和蛋白表达水平。然后,建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,地西他滨、顺铂单独或联合给药,计算各组移植瘤的体积并绘制生长曲线。给药完成后,取移植瘤组织,免疫组化法检测各组移植瘤组织Ki-67分子的表达水平,MSP技术检测SOX2基因的甲基化情况,RT-PCR、Western blot分别检测SOX2基因的mRNA和蛋白表达水平。结果:在体外细胞实验中,地西他滨(5μM)、顺铂(1μM、10μM、100μM)以及两者的联合应用均能以时间和(或)剂量依赖性的方式抑制人胃癌细胞BGC-823的生长增殖和迁移能力,均能一定程度地引起SOX2基因启动子区域DNA的去甲基化,增加SOX2基因的m RNA和蛋白表达量,而地西他滨联合顺铂则能协同发挥上述作用。在人胃癌裸鼠移植瘤模型中,地西他滨(5 mg/kg)、顺铂(6 mg/kg)对移植瘤的生长均有一定的抑制作用,而联合用药则能明显抑制移植瘤的生长和增殖能力。类似的,地西他滨和顺铂也均一定程度地增加了移植瘤组织中SOX2基因的去甲基化状态,上调了SOX2基因的mRNA和蛋白表达水平,而地西他滨联合顺铂则能协同发挥上述作用。结论:在体外细胞水平和人胃癌裸鼠移植瘤模型中,地西他滨联合顺铂能协同逆转SOX2基因的甲基化状态,重新恢复其mRNA和蛋白的表达,从而在抑制细胞生长增殖和迁移、诱导细胞凋亡、抑制移植瘤的生长和恶性增殖能力等过程中协同发挥抗肿瘤效应。