双孢蘑菇设施栽培优良菌株筛选及rDNA ITS序列分析

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双孢蘑菇不仅味道鲜美营养齐全,而且具有医疗保健作用,已成为目前世界上人工栽培最广泛、产量最高、消费量最大的食用菌,也是我国目前最大宗的出口创汇食用菌。目前,世界上先进的双孢蘑菇栽培技术是将现代化设施与现代生物技术相结合,而由于我国人工栽培双孢蘑菇起步较晚,栽培技术落后,同发达国家相比存在较大差距。为促进我国双孢蘑菇栽培业成为设施化和现代化的新型产业,筛选适宜于国内设施栽培条件的双孢蘑菇优良菌株具有重要意义。本文主要是在引进品种的基础上开展子实体组织分离培养选种试验,设施栽培优良菌株的筛选,并对筛选的优良菌株以ITS序列作为分子标记进行鉴定,以期为进一步遗传育种提供良好的分子标记。研究结果如下:(1)引进品种母种分离与选育。对引自加拿大设施化栽培的Ta、Tb两个品种子实体进行组织分离,共获得77株分离菌株,分别编号。然后进行分离菌株的菌丝生长指标测定以及出菇验证,从中选育出生长指标优良的母种两株,菌株编号为Ta02和Tb07。(2)引进筛选品种与国内主栽品种的生物学特性比较。对引进品种Ta和Tb、从Ta、Tb组织分离获得的优良菌株Ta02和Tb07及国内主栽品种As2796的生物学特性进行比较,主要比较不同菌株之间的菌丝生长情况、子实体生物学性状、生育期、生物学效率等。通过实验发现,分离菌株Tb07、Ta02菌丝长势均优于其出发菌株Tb、Ta, Tb07菌株又优于Ta02; Tb、Tb07菌株菇形中等,出菇早,且出菇整齐,其中Tb07表现出高产性状,平均产量最大,生物学效率最高,达到41.9%;在肉质性状方面,Tb07较As2796菌株好,表现为菇肉细嫩、口感好等性状,色泽洁白;综合各菌株菌丝生长情况、生育期、子实体生物学性状及生物学效率等几方面来看,Tb07在实验中表现出菇整齐、高产、优质等特性,符合设施化栽培要求的菌丝体同步性整齐性,因此,Tb07可作为适合我国设施栽培优良菌株。(3)引进筛选的优良菌株Tb07和国内As2796菌株rDNA ITS序列分析。对引进筛选的优良菌株Tb07和国内As2796这两个菌株的rDNA ITS序列进行测序,序列分析表明:在5.8S rDNA在两个品系间高度保守,其长度完全一致,且无变异位点,而2个菌株的ITS1及ITS2的碱基序列上则存在7个位点的碱基变化。这说明双孢蘑菇不同菌株的ITS序列存在一定程度的变异,这也证明了ITS序列可作为一种有效的分子标记来鉴别生产中大量混乱的品种。
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