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目的:制备双歧杆菌脂磷壁酸抗体,运用血清学方法初步探讨双歧制品中脂磷壁酸和双歧杆菌活菌的含量检测,为后者建立一种快速经济简单易行的可靠方法。方法:预先培养足够量的两歧双歧杆菌( Bifidobacterium bifidum ,编号:86321),用非离子型去垢剂Triton x-114提取两歧双歧杆菌的脂磷壁酸,加甲基化牛血清白蛋白与佐剂超声乳化,首剂免疫为完全佐剂,之后都用不完全佐剂。BALB/C小鼠随机分为高中低三个剂量组。先用卡介苗50μg/只注射小鼠进行多克隆激活,一周后第一次注射抗原,间隔两周再注射一次,再隔一周第三次注射抗原。高中低组剂量分别为每只150μg,100μg,50μg。第一次抗原免疫之后每隔一周采血一次,间接ELISA法检测抗体效价与特异性,观察同两歧双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌的反应性。.用免疫血清经双抗体夹心ELISA法和免疫结合微量培养的方法分别检测市售某品牌酸奶中脂磷壁酸和双歧杆菌活菌量结果:小鼠在一周后有微量抗体产生,各组差别不大,但免疫时间越久,这种差别越大,总体来说抗原剂量越大,抗体效价越高,中高剂量组差别不明显,免疫血清最高效价可达1:1280,与两歧双歧杆菌、婴儿双歧杆菌免疫反应都是强阳性,但与嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌皆为阴性。抗- mBSA最高血清效价为1:0～16,可以忽略。小鼠在高剂量组出现急性变态反应,一般在30 min内发作、出现抽搐、呼吸困难、瞳孔放大变色、心跳减弱甚至消失,有这些症状的死亡率很高,未死亡者2～6 h恢复生命体症。其他组没有出现过敏反应。对于酸奶中脂磷壁酸和双歧杆菌活菌的含量检测取得良好结果,活菌数值低于平板计数法结果,但相差不大。检测线可达105cfu/ml。结论:纯化的LTA没有免疫原性,但为一种很强的菌体抗原成份,加载体与佐剂能产生高效价抗体。该抗体是针对双歧杆菌细胞膜上LTA的双歧杆菌属特异性抗体,可用于检测存在于人和动物体内的双歧杆菌,与乳杆菌的交叉反应很低,与其它细菌无交叉反应。可用于检测抗原。免疫结合微量培养的方法也有效测定了酸奶中双歧杆菌活菌量,敏感性与特异性好。双歧杆菌脂磷壁酸的提取以及抗体的制备,抗原的检测都不需要特殊仪器设备,一般实验室都能开展,且简单易行,快速方便,适合市场上双歧食品中脂磷壁酸和双歧杆菌活菌的含量检测。